鐵缺乏對骨形成的影響及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 鐵缺乏對骨形成的影響及相關(guān)機(jī)制的研究
　　目的:鐵是人體必需的微量元素之一，鐵代謝與骨代謝關(guān)系密切，但鐵缺乏對骨形成的影響尚不清楚。本研究旨在了解鐵缺乏對骨形成的影響。
　　方法:以細(xì)胞膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白編碼基因fpn1突變體斑馬魚weissherbst（wehtp85c）為鐵缺乏組，野生型為對照組:鑒定純合突變體，進(jìn)行O-dianisidine血紅蛋白染色、茜素紅-S硬骨染色

2、、阿爾新藍(lán)軟骨染色、骨形成相關(guān)基因及骨形成相關(guān)通路關(guān)鍵因子表達(dá)檢測，以及注射右旋糖酐鐵拯救實(shí)驗(yàn)，最后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:(1)受精后2天(2days post fertilization，2dpf)的wehtp85c突變體斑馬魚血紅蛋白較野生型顯著減少，提示該突變體存在缺鐵;(2)wehtp85c突變體斑馬魚在5dpf、7dpf、14dpf時硬骨形成較野生型顯著減少;2dpf時軟骨形成較野生型無顯著性差異，提示該鐵缺乏可影響

3、硬骨形成;(3)qPCR結(jié)果提示，wehtp85c突變體斑馬魚硬骨形成相關(guān)基因alpl, runx2a，col1a1a表達(dá)量均較野生型顯著減少(p＜0.05)，而軟骨形成相關(guān)基因sox9b表達(dá)量較野生型無顯著性差異(p＞0.05);(4)wehtp85c突變體斑馬魚注射右旋糖酐鐵后骨形成增加，alpl, runx2a表達(dá)量上升;(5)wehtp85c斑馬魚與野生型斑馬魚相比，Wnt信號通路的關(guān)鍵因子catenin表達(dá)水平無明顯變化(p=

4、0.13)，而BMPs信號通路的關(guān)鍵因子bmp2a，bmp2b表達(dá)水平顯著降低(p＜0.05)。
　　結(jié)論:wehtp85c斑馬魚存在鐵缺乏，鐵缺乏可使硬骨形成減少，而對軟骨形成無顯著影響，其機(jī)制可能與BMPs信號通路有關(guān)，糾正機(jī)體鐵缺乏狀態(tài)后骨形成可以恢復(fù)。
　　第二部分 表皮生長因子基因多態(tài)性與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎易感性的關(guān)系研究
　　目的:表皮細(xì)胞生長因子(EGF)是一類多功能的細(xì)胞因子，具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)。有研究表

5、明，EGF與機(jī)體免疫功能相關(guān)。在早期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的滑液中，EGF顯著升高，提示EGF可能與RA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在相關(guān)性。本研究旨在探討EGF基因啟動子區(qū)SNPs（EGF rs3756261 T/C和EGF rs11568835 G/A）與RA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)。
　　方法:采用病例對照研究設(shè)計(jì)，病例組520例確診為RA的患者，對照組為520例年齡與性別與RA組相匹配的非RA患者，分別進(jìn)行EGF基因分型(EGF rs115688

6、35 G/A和EGF rs3756261 T/C多態(tài)性)。
　　結(jié)果:以EGF rs11568835 GG純合體作為參照組，AA基因型患RA的風(fēng)險(xiǎn)增高(AAversus GG, odds ratio[OR]=3.64,95％ confidence interval[CI]=1.19-11.17, p=0.024),而GA或GA/AA基因型與RA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)顯著性關(guān)聯(lián)(GA versus GG，OR=0.99，95％CI=0.75-

7、1.31, p=0.931;GA+AA versus GG, OR=1.06,95％ CI=0.81-1.40, p=0.659)。以EGF rs3756261 TT純合體基因型作為參照組，TC或CC或TC/CC基因型均與RA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無顯著性關(guān)聯(lián)(TC versus TT，OR=1.18，95％ CI=0.90-1.54，p=0.247; CC versusTT, OR=0.61,95％ CI=0.33-1.11, p=0.105; T