三磷酸腺苷(ATP)脂質(zhì)體的制備研究.pdf

1、研究背景:本課題旨在研究提高機體缺血缺氧組織對ATP的攝取,制備可方便臨床應用的靜脈使用或外用的的ATP新劑型;探索一種病灶靶向性高、不良反應少、作用穩(wěn)定的載藥系統(tǒng)。脂質(zhì)體是目前應用最為廣泛、治療效果最為肯定的載藥系統(tǒng)之一,其具有無毒,無免疫原性及良好組織相容性等諸多優(yōu)點。目前在研究的各種藥物載藥系統(tǒng)中,只有脂質(zhì)體己批準應用于臨床,其他的納米載藥系統(tǒng)絕大多數(shù)仍處于臨床前甚至實驗室研究階段。
　　 研究方法:本課題采用大豆磷脂和膽

2、固醇為主要膜材,以ATP為模型藥物,通過十八胺來調(diào)節(jié)脂質(zhì)體的Zeta電位,采用逆向蒸發(fā)法制備ATP脂質(zhì)體。以包封率為評價指標,采用正交試驗優(yōu)化處方及制備工藝?？疾炝肆字瑵舛?、磷脂和膽固醇比、藥脂比、水浴溫度、旋蒸儀轉速等對ATP脂質(zhì)體包封率的影響,建立了ATP脂質(zhì)體的含量測定方法及包封率測定方法,并初步研究了ATP脂質(zhì)體的理化性質(zhì)、體外釋放性質(zhì)、初步穩(wěn)定性等,為脂質(zhì)體制劑的開發(fā)應用提供了試驗基礎和理論依據(jù)。
　　 研究結果:

3、r>　　 1.ATP脂質(zhì)體藥物含量及包封率測定方法的建立
　　 采用超低溫超速離心法將載藥脂質(zhì)體與游離藥物分離,并建立了HPLC法測定脂質(zhì)體中ATP含量及包封率的測定方法。結果:ATP在20-640μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關系良好,以峰面積(A)對濃度(C)作線性回歸,得回歸方程為A=0.1602C+7.3767,r=0.9997。日內(nèi)、日間精密度RSD均小于2.0％,回收率中高濃度均在98％左右,但低濃度偏離較大,可能與儀器

4、誤差有關,日內(nèi)及日間RSD均小于2％。
　　 2.ATP脂質(zhì)體的制備工藝、處方研究及脂質(zhì)體的形態(tài)及理化性質(zhì)
　　 以ATP脂質(zhì)體的包封率為主要參考指標,將制備溫度、磷脂和膽固醇比、藥脂比、有機相/水相比例、水浴溫度及旋轉蒸發(fā)儀轉速等相關因素做單因素考察分析,在此基礎上,采用正交優(yōu)化設計法對ATP脂質(zhì)體處方進行考察,選取磷脂濃度、藥物脂質(zhì)質(zhì)量比、磷脂和膽固醇質(zhì)量比、旋轉蒸發(fā)儀轉速等為影響因素,以包封率為主要考察指標進行評價

5、,并最終得到了ATP脂質(zhì)體的優(yōu)化處方。結果采用優(yōu)化處方制得的ATP脂質(zhì)體經(jīng)在透射電鏡下為多囊狀的多層的類圓球體,于處方中加入與磷脂質(zhì)量比為0∶1、0.05∶1、0.10∶1的十八胺,得到的脂質(zhì)體的Zeta電位分別為2.1±0.4mv、12.3±1.2mv、20.4±2.6mv。
　　 通過固定處方加十八胺(與磷脂質(zhì)量比為0.05∶1)逆向蒸發(fā)法制備ATP脂質(zhì)體,得到脂質(zhì)體的粒徑為810.9nm,多分散系數(shù)為0.543。
　

6、　 最后以磷脂濃度為10mg/ml,磷脂與膽固醇質(zhì)量比為4∶1,藥脂質(zhì)量比為1∶2,旋蒸儀轉速為30r/min,十八胺與磷脂質(zhì)量比為0.05∶1,為最終優(yōu)化處方制備脂質(zhì)體,平均包封率分別為(56.99±4.91)％,載藥率為(21.81±1.89)％。
　　 3.ATP脂質(zhì)體的體外釋藥動力學及初步穩(wěn)定性研究
　　 采用與人血漿等滲的pH=7.4的磷酸鹽緩沖液作為釋放介質(zhì),其中含137 mmol/LNaCl、3 mmol

7、/L KCl、8 mmol/L Na2HPO4和1 mmol/L KH2PO4。采用動態(tài)透析膜法進行脂質(zhì)體混懸液中藥物的體外釋放研究。結果:ATP脂質(zhì)體的釋放曲線方程為:Lnln(1/(1-Q))=0.587lnt-1.656,更為符合weibull釋放數(shù)學模型。
　　 初步穩(wěn)定性考察結果表明ATP脂質(zhì)體4℃貯存15天藥物滲漏率達27.74％,因此,為了增加脂質(zhì)體穩(wěn)定性,課題計劃下一步采用冷凍干燥法將ATP脂質(zhì)體制備ATP前體脂