蘋果梨果實(shí)PAL和CHS基因克隆與分析及PAL基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、蘋果梨（Pingguoli）是薔薇科（Rosaceae）梨屬（Pyrus）植物，因其個(gè)大、耐寒、豐產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)，陽(yáng)面著紅色，肉質(zhì)酥脆多汁而備受消費(fèi)者喜愛(ài)。本試驗(yàn)通過(guò)RT-PCR技術(shù)對(duì)影響蘋果梨果實(shí)著色相關(guān)酶（PAL、CHS）基因全長(zhǎng)進(jìn)行了克隆，并且構(gòu)建了 PAL基因的植物表達(dá)載體，以期為進(jìn)一步探明蘋果梨果實(shí)著色的分子機(jī)理及研究其基因功能奠定了基礎(chǔ)。結(jié)果如下：
　　1、首次從蘋果梨中成功地克隆了PAL基因的全長(zhǎng)cDNA序列，命名為PyP

2、AL。PyPAL cDNA全長(zhǎng)2160bp，推測(cè)其編碼719個(gè)氨基酸，分子量（MV）為77.91KDa，等電點(diǎn)（PI）值為6.18。經(jīng)同源性比較PyPAL與一些薔薇科植物序列高度同源。
　　2、生物信息學(xué)分析表明，PyPAL整條多肽鏈中親水氨基酸416個(gè)，疏水氨基酸295個(gè)，整條多肽鏈表現(xiàn)為親水性，定位于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，且無(wú)轉(zhuǎn)運(yùn)肽，不存在跨膜結(jié)構(gòu)域。PyPAL蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示：α-螺旋(H)占50.49％，β-折疊（E）占2.36

3、%，無(wú)規(guī)卷曲（C）占47.15%。故PyPAL蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)以α-螺旋和無(wú)規(guī)卷曲為主。
　　3、構(gòu)建了含有PAL基因的植物表達(dá)載體PBI121-PyPAL，利用凍融轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化到根癌農(nóng)桿菌LBA4404中。為將PyPAL轉(zhuǎn)化到模式植物或其他植物進(jìn)而了解其功能奠定了基礎(chǔ)。
　　4、克隆得到的蘋果梨CHS基因的全長(zhǎng)cDNA序列為1170bp，命名為PyCHS1，其中A+T含量為47.26%，C+G為52.74%，推測(cè)其編碼389個(gè)氨

4、基酸，分子量為42.5KDa，等電點(diǎn)為5.77。經(jīng)同源性比較PyCHS1與一些薔薇科植物序列高度同源。
　　5、生物信息學(xué)分析表明，PyCHS1整條多肽鏈中親水氨基酸215個(gè)，疏水氨基酸166個(gè)，整條多肽鏈表現(xiàn)為親水性，定位于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，且無(wú)轉(zhuǎn)運(yùn)肽，不存在跨膜結(jié)構(gòu)域。PyCHS1蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示：α-螺旋（H）和無(wú)規(guī)卷曲（C）各占44.22%和32.39%，而β-折疊（E）則達(dá)到23.39%。故PyCHS1蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)以α-螺