蘋果抗壞血酸過氧化物酶基因的克隆及其植物表達載體的構(gòu)建.pdf

1、植物在生長發(fā)育過程中經(jīng)常受到環(huán)境因素的脅迫，嚴重影響植物的正常生長和發(fā)育過程。當植物遇到高溫、干旱等逆境時，植物體內(nèi)會產(chǎn)生大量的活性氧。而抗壞血酸過氧化物酶(APX)是清除活性氧的關(guān)鍵酶，對于保護葉綠體和其他細胞組分免受H<,2>O<,2>及其所產(chǎn)生的羥基自由基的破壞是必不可少的。當植物體內(nèi)的活性氧積累時，能快速誘導(dǎo)APX表達，APX催化抗壞血酸與H<,2>O<,2>反應(yīng)而使H<,2>O<,2>被分解。迄今尚未見到從蘋果中克隆到抗壞血酸

2、過氧化物酶基因全長的報道。 本試驗以皇爭家嘎拉蘋果葉片為試材，克隆了抗壞血酸過氧化物酶基因cDNA全長并構(gòu)建其植物表達載體，為進一步研究其作用機制以及通過遺傳轉(zhuǎn)化提高植物的抗脅迫能力奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 1．利用改進的SDS-熱酚法得到了高質(zhì)量的RNA，為后續(xù)試驗的順利進行奠定了基礎(chǔ)。 2．根據(jù)Genbank中已經(jīng)登錄的煙草、辣椒、龍眼和楊樹APX基因序列的保守區(qū)設(shè)計并合成引物，通過RT-PCR擴增到一個

3、中間片段，然后再運用3’-RACE和5’-RACE分別擴增到蘋果APX cDNA的3’端和5’端序列，最后設(shè)計一對特異引物獲得蘋果APX基因cDNA全長。該序列全長 992bp，包括1個最大的開放閱讀框，編碼250個氨基酸。同源性分析表明它與其他物種的APX基因均具有較高的同源性，表明已成功獲得了皇家嘎拉蘋果葉片APx基因cDNA全長(GenBank No．EF528482)。 3．將APX基因cDNA全長定向插入到植物表達載體