一株豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定、毒力及病毒蛋白的研究.pdf

1、本文對(duì)來(lái)自臨床的疑似豬繁殖與呼吸綜合征的豬肺臟病料進(jìn)行病毒分離，在Marc-145細(xì)胞上分離得到一株病毒，定名為PP03。經(jīng)傳代后，細(xì)胞病變出現(xiàn)穩(wěn)定，以細(xì)胞圓縮、聚集、脫落為特征。該病毒接種Vero、PK15細(xì)胞并盲傳三代均不出現(xiàn)細(xì)胞病變。 通過(guò)電鏡觀察可以看出該病毒粒子呈球形，有囊膜，大小為65-70nm左右，在細(xì)胞中分布于細(xì)胞漿。通過(guò)免疫電鏡可以看到病毒與抗體形成的抗原抗體復(fù)合物。在理化試驗(yàn)中，該病毒56℃30 min被滅活

2、，對(duì)酸度變化較為敏感，在PH6.5-7.2環(huán)境中病毒毒力穩(wěn)定。該病毒TCID<,50>為10<'-3.62>/ml，在傳代細(xì)胞上毒力中等，通過(guò)血清中和試驗(yàn)最終證明PP03是一株P(guān)RRSV病毒。 在動(dòng)物試驗(yàn)中，PP03很好的復(fù)制出了豬繁殖與呼吸綜合征臨床癥狀。PP03試驗(yàn)豬表現(xiàn)出典型的呼吸癥狀，剖解可以看出其肺臟出現(xiàn)典型的間質(zhì)性肺炎病變。采集發(fā)病豬血清作ELISA抗體檢測(cè)，可以觀察到抗體效價(jià)在接種后的變化規(guī)律，接種后10～20 d

3、抗體水平出現(xiàn)急劇升高和降低，30 d后趨于平穩(wěn)并在其后一段時(shí)間內(nèi)維持在一個(gè)較高的水平。從發(fā)病豬肺臟再次成功分離得到一致的病毒。參考毒株ZM接種豬未表現(xiàn)任何明顯臨床癥狀，剖解后肺臟亦無(wú)明顯病理變化。通過(guò)ELISA抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在接種ZM后10～24 d抗體呈現(xiàn)溫和的上升趨勢(shì)，接種后28 d達(dá)到較高水平后趨于平穩(wěn)。在對(duì)ZM接種豬的肺臟進(jìn)行病毒分離后亦得到相同的病毒。 通過(guò)SDS-PAGE蛋白電泳，分析了PP03的病毒蛋白，并與參考毒