靶向豬繁殖與呼吸綜合征病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSP12的shRNA抑制豬繁殖與呼吸綜合征病毒在Marcl45細(xì)胞中復(fù)制.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)，屬于動(dòng)脈炎病毒科動(dòng)脈炎病毒屬，為單股正鏈RNA病毒，基因組全長(zhǎng)約15kb，含有9個(gè)開(kāi)放性閱讀框。開(kāi)放性閱讀框1a(ORF1a)和開(kāi)放性閱讀框1b(ORF1b)占整個(gè)基因組的80％。ORF1a上游編碼一個(gè)單個(gè)的聚合蛋白1a(pp1a)，該聚合蛋白被預(yù)測(cè)可被切割成8個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，即NSP1-8。ORF1b下游編碼一個(gè)聚合蛋白，其與pp1a共同參與核糖體移碼的機(jī)制。ORF1ab的基因產(chǎn)物與聚合蛋白1ab(

2、pp1ab)有關(guān)。ORF1b編碼的聚合蛋白可被水解蛋白酶裂解，形成NSP9-12的多肽。剩余的開(kāi)放性閱讀框(2a,2b和3-7)編碼病毒的結(jié)構(gòu)性糖蛋白2a、3、4、5(GP2a，GP3，GP4，GP5)，非糖基化的2b/E，膜蛋白和核蛋白。
　　 RNA干擾(RNAi)是小干擾RNA分子引起的自然發(fā)生的基因抑制的細(xì)胞機(jī)制，其中這些siRNA與靶基因的某些區(qū)域具有同源性。RNAi的應(yīng)用可通過(guò)兩種類型的分子調(diào)節(jié):一種是化學(xué)合成的雙鏈

3、小干擾RNA(siRNA)，另外一種是連接載體的小發(fā)夾RNA(shRNA)。為了達(dá)到shRNA有效構(gòu)建的高效能和可持續(xù)的效應(yīng)，通常利用低拷貝數(shù)的shRNA，減少脫靶效應(yīng)，并且其可誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生長(zhǎng)效性的RNA沉默，而小干擾RNA在轉(zhuǎn)染的動(dòng)物細(xì)胞中的效應(yīng)相比較而言，比較短暫。最近幾年，RNA干擾作為一種實(shí)驗(yàn)室工具從而被廣泛應(yīng)用，主要用于病毒和細(xì)胞基因功能的研究，從而達(dá)到識(shí)別基因調(diào)節(jié)病毒感染和復(fù)制的目的，并且可作為一種新的治療病毒感染的