

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)是一種發(fā)生于老年或老年前期的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變疾病,以進行性的記憶認知障礙、人格改變?yōu)橹饕卣?,其典型的病理變化包括?淀粉樣蛋白(Aβ)沉積、Tau蛋白異常過度磷酸化、皮層與海馬組織廣泛神經(jīng)元丟失。隨著全球老齡化的進程,其發(fā)病率日益增加,給家庭和社會帶來了沉重的負擔(dān),AD已成為當今神經(jīng)科學(xué)及老年醫(yī)學(xué)備受關(guān)注的研究課題,開發(fā)AD治療藥物、探討分子作用機制迫在眉睫。
2、 目的:
(1)檢測銀杏內(nèi)酯A對N2a細胞的毒性以及對岡田酸(OA)誘導(dǎo)的N2a細胞凋亡的保護作用。
(2)探討銀杏內(nèi)酯A對OA誘導(dǎo)的N2a細胞Tau蛋白磷酸化水平和PI3K-Akt通路的影響。
(3)研究銀杏內(nèi)酯A對Aβ誘導(dǎo)的擬AD小鼠腦神經(jīng)元損傷及Tau蛋白異常磷酸化的影響。
方法:
(1)以鼠成神經(jīng)母細胞瘤細胞(N2a)為對象,MTT法檢測不同劑量的銀杏內(nèi)酯A
3、對N2a細胞的毒性以及對岡田酸(OA)誘導(dǎo)的N2a細胞死亡的保護作用;吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙染熒光顯微鏡法觀察銀杏內(nèi)酯A對OA作用下的N2a細胞的保護作用;AnnexinV-FITC/PI雙染法流式細胞術(shù)檢測銀杏內(nèi)酯A對OA誘導(dǎo)的N2a細胞凋亡的影響。
(2)使用OA干預(yù)N2a細胞生長,誘導(dǎo)細胞Tau蛋白過度磷酸化,銀杏內(nèi)酯A藥物處理后,酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測N2a細胞裂解物中總P-Tau的含量,蛋白
4、免疫印跡法(westernblot)檢測p-Tau、p-GSK3β、p-PI3K及p-Akt的表達。
(3)Aβ1-40腦內(nèi)海馬單側(cè)注射建立擬阿爾茨海默病(AD)動物模型,觀察擬AD小鼠行為學(xué)改變;ELISA和westernblot檢測小鼠海馬組織中Tau蛋白磷酸化水平,HE染色法觀察小鼠腦神經(jīng)細胞病理形態(tài)變化。
結(jié)果:
(1)不同濃度的銀杏內(nèi)酯A(10-4-10-7M)處理細胞24小時后,濃度
5、依賴性地阻止了OA誘導(dǎo)的細胞活力下降;與正常對照相比,OA模型組細胞凋亡及壞死數(shù)量明顯升高,不同濃度銀杏內(nèi)酯A作用后的細胞凋亡和壞死狀況有所改善,且銀杏內(nèi)酯A高劑量組(10-4M)細胞幾乎恢復(fù)至正常狀態(tài),表明銀杏內(nèi)酯A對OA誘導(dǎo)的細胞凋亡具有保護及改善作用。
(2)低劑量銀杏內(nèi)酯A(10-7M)效果不明顯,但隨著銀杏內(nèi)酯A濃度的增加,Tau蛋白異常磷酸化顯著改善,GSK-3βSer9位點的絲氨酸殘基磷酸化也得到抑制,同時P
6、I3K和Akt的Tyr508和Ser473位點被磷酸化。
(3)與模型組相比,銀杏內(nèi)酯A處理的擬AD小鼠Tau蛋白磷酸化水平有所下降,神經(jīng)元的數(shù)量顯著增多,形態(tài)也比較完整,銀杏內(nèi)酯A可以對抗由Aβ誘導(dǎo)引起的毒性作用。
結(jié)論:
神經(jīng)細胞凋亡是AD發(fā)生過程中的一個重要機制,研究發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯A對OA誘導(dǎo)的N2a細胞凋亡具有一定程度的保護作用;NFTs是AD患者腦內(nèi)典型的病理特征之一,異常磷酸化Tau蛋
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
評論
0/150
提交評論