熱刺激誘導(dǎo)骨轉(zhuǎn)移癌小鼠爆發(fā)痛模型的初步研究.pdf

1、目的:建立熱刺激誘導(dǎo)C57BL/6骨轉(zhuǎn)移癌小鼠爆發(fā)痛模型并對其進(jìn)行評價(jià)。
　　方法:1.骨癌痛小鼠模型的建立:按Huang Dong[13]等的方法:培養(yǎng)Lewis肺癌細(xì)胞收集并計(jì)數(shù);接種Lewis肺癌細(xì)胞于C57BL/6小鼠左側(cè)股骨骨髓腔內(nèi)，建立骨癌痛模型;因本課題組前期實(shí)驗(yàn)中觀測到腫瘤細(xì)胞接種14天后用von Frey纖維絲檢測小鼠左后足顯示痛閾降低最顯著，故選擇在骨癌痛模型建立后第14天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2.適宜嗎啡鎮(zhèn)痛劑量的選擇:

2、選取體重18-22g的健康雄性C57BL/6小鼠24只，隨機(jī)分為4組(N=6):正常組（正常小鼠）;低劑量嗎啡組（小鼠左側(cè)股骨骨髓腔接種腫瘤細(xì)胞后第14天，腹腔注射嗎啡3 mg/kg）;高劑量嗎啡組(小鼠左側(cè)股骨骨髓腔接種腫瘤細(xì)胞后第14天，腹腔注射嗎啡6mg/kg);對照組（小鼠左側(cè)股骨骨髓腔接種腫瘤細(xì)胞后第14天，腹腔注射同等量的生理鹽水）。在注射嗎啡后0-120分鐘內(nèi)通過用vonFrey絲檢測各組小鼠左后足痛閾值，通過比較不同劑量

3、嗎啡鎮(zhèn)痛效果選取適宜的嗎啡劑量。3.熱刺激誘導(dǎo)爆發(fā)痛模型的建立:前步實(shí)驗(yàn)顯示腹腔注射嗎啡(6mg/kg)40分鐘后可以使骨轉(zhuǎn)移小鼠達(dá)到充分鎮(zhèn)痛和適宜的熱刺激時(shí)間窗(40分鐘-120分鐘)，選取體重18-22g的健康雄性C57BL/6小鼠24只，隨機(jī)分為4組(N=6):正常組（正常小鼠，第14天后腹腔注射嗎啡6mg/kg，40分鐘后采用熱刺激儀以55℃20s持續(xù)刺激左后肢股骨處）;假手術(shù)組（小鼠左側(cè)股骨骨髓腔接種10ulD-Hanks液后

4、第14天，腹腔注射嗎啡6mg/kg，40分鐘后采用熱刺激儀以55℃20s持續(xù)刺激左后肢股骨處）;熱刺激組（小鼠左側(cè)股骨骨髓腔接種腫瘤細(xì)胞后第14天，腹腔注射嗎啡6mg/kg，40分鐘后采用熱刺激儀以55℃20s持續(xù)刺激左后肢腫瘤部位）;非熱刺激組（小鼠左側(cè)股骨骨髓腔接種腫瘤細(xì)胞后第14天，腹腔注射嗎啡6mg/kg，40分鐘后在左后肢股骨腫瘤部位只接觸探頭不加熱）。所有組用von Frey纖維絲測痛閾值、觀察疼痛行為學(xué)并進(jìn)行左后足行走評分

5、，對熱刺激誘導(dǎo)的骨轉(zhuǎn)移癌小鼠爆發(fā)痛模型進(jìn)行評價(jià)。
　　結(jié)果:1.骨癌痛小鼠模型成功建立，各指標(biāo)與Huang Dong[13]研究相一致。2.選取高劑量組嗎啡(6mg/kg)作為適宜劑量。von Frey痛閾值顯示，低劑量嗎啡組和高劑量嗎啡組均可使骨癌痛小鼠達(dá)到完全鎮(zhèn)痛與正常組無差異（p＞0.05），與對照組有差異(p＜0.05)，但高劑量嗎啡組在更短時(shí)間內(nèi)使骨癌痛小鼠達(dá)到鎮(zhèn)痛且具有更寬的可供熱刺激的時(shí)間窗(40分鐘-120分鐘)。

6、3.熱刺激誘導(dǎo)爆發(fā)痛模型的初步建立。von Frey痛閾值檢測、觀察疼痛行為學(xué)和后足行走評分顯示:熱刺激組痛閾值改變與其他各組相比存在顯著差異(p＜0.05)，短時(shí)間內(nèi)快速降低至最低點(diǎn);熱刺激組刺激后短時(shí)間內(nèi)小鼠出現(xiàn)患肢嚴(yán)重跛行、頻繁搔抓、舔患肢、全身抽搐和痛苦表情;熱刺激組與其他各組相比存在顯著差異(p＜0.05)，熱刺激組刺激后出現(xiàn)短時(shí)間內(nèi)評分顯著下降(p＜0.05)，并在15分鐘內(nèi)恢復(fù)至鎮(zhèn)痛后的原始分值。兩因素方差分析和非參數(shù)檢驗(yàn)