懷牛膝細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及細(xì)胞中多糖含量的調(diào)控.pdf

1、本文首次對懷牛膝的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及細(xì)胞中多糖含量的調(diào)控進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。結(jié)果表明：(1)通過懷牛膝種子形成的試管苗可以通過腋生枝型和多芽體發(fā)生型兩條途徑進(jìn)行繁殖，適宜的培養(yǎng)基分別為MS+0.01 mg·L<'-1>NAA+0.5 mg·L<'-1>6-BA和MS+0.01 mg·L<'-1>TDZ；適宜于試管苗生根的培養(yǎng)基為MS+0.05mg·L<'-1>NAA+1 mg·L<'-1>PP<,333>；(2)試管苗的葉片在B<,5>+2

2、mg·L<'-1>2,4-D+0.5 mg·L<'-1>6-BA+30g/L葡萄糖+1g/LCH的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)形成的愈傷組織，經(jīng)過3-5次繼代后可以得到四種不同類型的愈傷組織，選擇淡黃色，小顆粒，結(jié)構(gòu)疏松，生長迅速的愈傷組織(Ⅰ型)可以建立細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系；(3)細(xì)胞的生長曲線呈“S”型，可分為延遲期(0-6 d)、指數(shù)生長期(6-15 d)和緩慢生長期(15-21 d)三個(gè)階段；多糖含量在6 d時(shí)達(dá)到第一個(gè)高峰后即呈現(xiàn)下降趨勢，在15

3、d時(shí)達(dá)到第二個(gè)高峰(比第一個(gè)峰值低)；可溶性蛋白質(zhì)含量在9 d時(shí)達(dá)到峰值，比細(xì)胞生長高峰提前6 d，之后呈下降趨勢，15 d以后基本穩(wěn)定；POD活性3-6 d呈小幅增長，經(jīng)短暫的平穩(wěn)期后于9 d時(shí)開始迅速上升，15 d時(shí)達(dá)到高峰，之后持續(xù)下降，在一定程度上可以反映細(xì)胞的生長狀況；SOD活性在12 d時(shí)達(dá)到峰值，比POD活性峰早，之后下降并維持在一定的水平；懸浮培養(yǎng)液的pH值先下降后趨于平緩，維持在3.7-3.9之間，最終又回復(fù)到初始水平

4、，反映細(xì)胞適宜在酸性環(huán)境中生長，同時(shí)具有自我調(diào)節(jié)pH的能力；培養(yǎng)液的電導(dǎo)率在0-12 d一直呈下降趨勢，在12 d時(shí)降至最低點(diǎn)，隨即有所回升，后漸趨于平緩，與細(xì)胞生長呈現(xiàn)一定的相關(guān)性；(4)LS+30g/L蔗糖+0.5 mg·L<'-1>6-BA+0.5g/LCH培養(yǎng)基有利于懷牛膝細(xì)胞中多糖含量的提高，50g/L的接種量、14 d的繼代周期，60 mol/LNO<,3><'->的單一氮源、45g/L的混合碳源(蔗糖：葡萄糖為1：1)、p

5、H值5-6、光照培養(yǎng)以及較大的培養(yǎng)瓶體積都可以使細(xì)胞保持良好的生長狀態(tài)和多糖合成能力；(5)采用食用菌類榆黃蘑作為真菌誘導(dǎo)子，在培養(yǎng)9 d時(shí)添加5 mgGE·L<'-1>，收獲時(shí)細(xì)胞中多糖含量可以達(dá)到6.56 nag·g<'-1>，但對細(xì)胞生長影響較大，最終細(xì)胞干重較??；在培養(yǎng)12 d時(shí)添加2.5％(v/v)的酵母誘導(dǎo)子，細(xì)胞干重最大，可達(dá)46.75g/L，多糖含量僅次于前者；添加50μmol/LCu<'2+>，細(xì)胞干重和多糖含量都次于