

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、懸浮細(xì)胞傳代及細(xì)胞計(jì)數(shù)懸浮細(xì)胞傳代及細(xì)胞計(jì)數(shù)一、一、細(xì)胞傳代細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆諔腋〖?xì)胞傳代技術(shù)。進(jìn)一步掌握細(xì)胞培養(yǎng)的操作技術(shù)。實(shí)驗(yàn)原理:實(shí)驗(yàn)原理:培養(yǎng)細(xì)胞生長一定時間后,需分離再培養(yǎng),否則細(xì)胞因生存空間不夠,細(xì)胞密度過大,致營養(yǎng)不足而引起細(xì)胞衰老、停止生長甚至死亡。為了維持細(xì)胞的存活和生長,必須進(jìn)行再培養(yǎng),即將原培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞分離、稀釋、接種到新培養(yǎng)瓶內(nèi)繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)用品:實(shí)驗(yàn)用品:(一)儀器凈化工作臺、離心機(jī)、恒溫水浴
2、箱、冰箱(4℃、20℃、70℃)、倒置相差顯微鏡、培養(yǎng)箱;(二)玻璃器皿吸管(彎頭、直頭)、培養(yǎng)瓶、廢液缸、(三)塑料器皿吸頭、槍頭、膠塞、移液管、15ml離心管、離心管架(四)其他物品微量加樣槍、計(jì)數(shù)板、記號筆、移液槍(五)試劑1640培養(yǎng)液、PBS操作步驟:操作步驟:1.準(zhǔn)備:打開培養(yǎng)液,PBS;取出離心管,擰開管蓋,管蓋倒放。從吸管筒中依次取出吸管,裝上吸頭,插入離心管備用。2.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞,放在顯微鏡下觀察其生長狀態(tài)、密度
3、。3.首先觀察培養(yǎng)板孔中培養(yǎng)液量。用吸管分別吸出兩個孔中的細(xì)胞連同培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)入離心管中。再另取一只吸管吸取PBS,放入培養(yǎng)板孔中,輕輕吹打孔壁,inhibition)。而惡性腫瘤細(xì)胞無接觸抑制現(xiàn)象,能繼續(xù)移動和增殖,導(dǎo)致細(xì)胞向三維空間擴(kuò)展,使細(xì)胞發(fā)生堆積(piledup)。細(xì)胞接觸匯合成片后,雖然發(fā)生接觸抑制,但只要營養(yǎng)充分,細(xì)胞仍能進(jìn)行增殖分裂,因此細(xì)胞數(shù)仍然在增多。但是,當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大,培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分減少,代謝產(chǎn)物增多時,細(xì)
4、胞因營養(yǎng)枯竭和代謝產(chǎn)物的影響,導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止,這種現(xiàn)象稱密度抑制現(xiàn)象(DensityInhibition)。(3)停滯期(Stagnatephase)細(xì)胞數(shù)量達(dá)到飽和密度后,如不及時進(jìn)行傳代,細(xì)胞就會停止增殖,進(jìn)入停止期。此時細(xì)胞數(shù)持平,故也稱平臺期(Plateauphase)。停滯期細(xì)胞雖不增殖,但仍有代謝活動。如不進(jìn)行分離傳代,細(xì)胞會因培養(yǎng)液中營養(yǎng)耗盡、代謝產(chǎn)物積聚、pH下降等因素中毒,出現(xiàn)形態(tài)改變,貼壁細(xì)胞會脫落,嚴(yán)重的會發(fā)生死
5、亡,因此,應(yīng)及時傳代。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)?zāi)康模?.能獨(dú)立的進(jìn)行細(xì)胞技術(shù),會繪制生長曲線,了解細(xì)胞生長的發(fā)育特性。2.學(xué)習(xí)在科研中如何應(yīng)用生長曲線實(shí)驗(yàn)原理:實(shí)驗(yàn)原理:生長曲線的測定(計(jì)數(shù)法)是測定細(xì)胞絕對生長數(shù)的常用方法,也是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo),為培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)之一。一般細(xì)胞傳代之后,經(jīng)過長短不同的潛伏期,即進(jìn)入大量分裂的指數(shù)生長期。在細(xì)胞達(dá)到飽和密度后,停止生長,進(jìn)入平頂期,然后退化衰亡。為了準(zhǔn)確描述整個過程中的細(xì)胞數(shù)目的
6、動態(tài)變化,需連續(xù)對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),通常計(jì)數(shù)7天。為精確起見,一般每次計(jì)數(shù)三瓶細(xì)胞并取平均值。典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期,成平臺狀的平頂期及退化衰亡四個部分。以存活細(xì)胞數(shù)對培養(yǎng)時間做圖,即生長曲線。生長曲線常用于測定藥物等外來因素對細(xì)胞生長的影響。一般在對數(shù)期的1312處加藥。細(xì)胞技術(shù)的時間和次數(shù)依實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?。另外,測定生長曲線的常用方法還有MTT法。計(jì)數(shù)板原理:計(jì)數(shù)板原理:當(dāng)待測細(xì)胞懸液中細(xì)胞均勻分布時,通過測定一定體積懸液中
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 第5章+細(xì)胞培養(yǎng)++講義
- 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
- 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
- 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)技術(shù)
- 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)cellculturetechnique
- 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)實(shí)用篇
- 組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
- 細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)
- 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)考試重點(diǎn)
- 植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)
- 細(xì)胞培養(yǎng)
- 實(shí)用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
- 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)問題整理題庫
- 293細(xì)胞培養(yǎng)
- 植物細(xì)胞培養(yǎng)
- 植物細(xì)胞培養(yǎng)
- 細(xì)胞培養(yǎng)過程
- 動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用
- 細(xì)胞培養(yǎng)從頭學(xué)
- 南方紅豆杉懸浮細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇及其細(xì)胞培養(yǎng)物的化學(xué)成分研究.pdf
評論
0/150
提交評論