肝臟干細(xì)胞分離培養(yǎng)及體外細(xì)胞因子調(diào)控的實驗研究.pdf

1、目的:該實驗旨在探討HSC的起源和定位,探討一種操作簡單、費用節(jié)省,結(jié)果可靠的HSC分離培養(yǎng)方法,為體外分離培養(yǎng)提供一種可行的途徑.同時對體外培養(yǎng)的干細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞因子調(diào)控,為臨床應(yīng)用探索新的途徑.方法:1.大鼠HSC模型的建立及定位:選擇DAB誘導(dǎo)模型并且通過病理和組織免疫組化的方法研究SD大鼠HSC的分布.2.大鼠HSC分離培養(yǎng)及超微結(jié)構(gòu)觀察:利用門靜脈灌注消化和密度梯度離心法從成體大鼠肝臟分離HSC并進(jìn)行體外培養(yǎng),通過細(xì)胞相差顯微鏡

2、攝影、細(xì)胞透射和掃描電鏡攝影及測量細(xì)胞生長曲線來觀察HSC的生物學(xué)特征.3.HGF、EGF對體外培養(yǎng)大鼠的HSC增殖的影響:對分離的HSC用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng),分別加不同濃度的EGF、HGF及EGF聯(lián)合HGF,應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽(Mononuclear cell direccytotoxicity assay,MTT)比色法,觀察不同濃度和不同時間HGF、EGF及HGF和EGF聯(lián)合對大鼠HSC增殖的影響.結(jié)論:1.DAB模型是一個操作簡單