秦艽細(xì)胞懸浮培養(yǎng)研究.pdf

1、龍膽苦苷(Gentiopicroside)為裂環(huán)環(huán)烯萜苷類化合物,具有保肝利膽、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、健胃、抗?jié)兊人幚碜饔?。用龍膽苦苷研究開發(fā)新藥具有良好的應(yīng)用前景,但隨著龍膽苦苷的開發(fā)利用,其來源問題突現(xiàn)。本論文選用秦艽為研究材料,嘗試采用植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方法生產(chǎn)龍膽苦苷,以期解決龍膽苦苷的來源問題。
　　 本論文以龍膽苦苷積累量為指標(biāo),以高效液相色譜法為分析手段,研究了高產(chǎn)細(xì)胞系的篩選、培養(yǎng)條件的優(yōu)化;研究了

2、細(xì)胞生長(zhǎng)、龍膽苦苷積累及主要營養(yǎng)成分的消耗關(guān)系與規(guī)律。研究結(jié)果如下:
　　 1.采用紫外誘變--小細(xì)胞團(tuán)法篩選得到高產(chǎn)龍膽苦苷的細(xì)胞系UV-4-b,該細(xì)胞系龍膽苦苷含量為0.242mg/g,比篩選前提高了64.63％。
　　 2.本論文細(xì)胞種齡、裝液量影響的試驗(yàn)結(jié)果,結(jié)合前期課題組研究,得到最佳懸浮培養(yǎng)條件為:MS為基本培養(yǎng)基、初始pH7.0、30g/L蔗糖為碳源、接種細(xì)胞種齡為15d,裝液量為40％～50％,25℃、1

3、10r/min下暗培養(yǎng)。
　　 3.誘導(dǎo)子對(duì)秦艽懸浮細(xì)胞影響結(jié)果表明:100mg/L黑曲霉誘導(dǎo)子及20mg/L蜜環(huán)菌誘導(dǎo)子,使龍膽苦苷含量比對(duì)照組分別提高了12.3％、13.7％,產(chǎn)量分別提高了23.99％、9.06％。米曲霉誘導(dǎo)子及酵母菌誘導(dǎo)子對(duì)秦艽細(xì)胞生長(zhǎng)及龍膽苦苷的積累都有明顯的抑制作用。
　　 4.秦艽懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)受初始蔗糖、氮、磷濃度的影響。不同蔗糖濃度影響細(xì)胞的指數(shù)生長(zhǎng)期持續(xù)時(shí)間,從而影響最大生物量;不同氮

4、濃度影響細(xì)胞延滯期持續(xù)時(shí)間;不同磷濃度影響細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài),高磷濃度(2.5mmol/L及5mm01/L)對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)不利。適合細(xì)胞生長(zhǎng)的蔗糖濃度為:30～50g/L,氮濃度為60mmol/L,磷濃度為0.625～1.25mmol/L。
　　 5.秦艽懸浮細(xì)胞中龍膽苦苷含量呈現(xiàn)兩階段積累的情況。龍膽苦苷積累與細(xì)胞生長(zhǎng)有關(guān),符合延滯期越短,龍膽苦苷開始積累越快的規(guī)律,且最高龍膽苦苷含量,符合細(xì)胞生物量越高,龍膽苦苷含量越低的規(guī)律。