油茶葉黃酮類化合物的分離及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、油茶葉為山茶屬油茶（Camellia Oleifera Abel.）的葉子，研究表明其含有脂肪、蛋白質(zhì)、還原糖、酸、氨基酸、茶皂素、葉綠素以及黃酮類化合物等多種成分，營(yíng)養(yǎng)豐富。目前以油茶葉為原料的研究大都局限在以總黃酮為指標(biāo)對(duì)不同提取方法進(jìn)行工藝優(yōu)化，進(jìn)而將醇提物或經(jīng)初步純化的提取物做抗氧化或抑菌性質(zhì)研究，很少有文章對(duì)其醇提物中具體成分進(jìn)行深入探究。基于此，本文將以油茶葉為原料，重點(diǎn)研究油茶葉醇提物的分離純化方法，并對(duì)純化得到的單體物質(zhì)

2、進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。具體內(nèi)容及結(jié)論如下:
　　1)油茶葉黃酮類化合物提取工藝優(yōu)化及其抗氧化能力探究
　　本試驗(yàn)以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照，以提取的油茶葉總黃酮含量為指標(biāo)，對(duì)超聲波輔助提取工藝進(jìn)行了單因素及正交優(yōu)化，并測(cè)定了最佳工藝下提取物對(duì)DPPH自由基、ABTS自由基和羥自由基的清除率。結(jié)果表明:用50％乙醇溶液，超聲提取2次，每次超聲處理30 min、料液比1∶20，溫度70℃，超聲提取效果最佳;油茶葉乙醇提取物具有很強(qiáng)的DPPH自由

3、基、ABTS自由基及羥自由基清除活性，IC50分別為15.117μg/mL、24.141μg/mL、0.561 mg/mL，在一定濃度范圍內(nèi)其清除率與濃度呈正相關(guān)。
　　2)油茶葉50％及80％乙醇提取物分離提純工藝研究
　　本試驗(yàn)將D-101大孔樹脂層析、硅膠柱層析和HPLC半制備三種方法結(jié)合起來分離油茶葉50％及80％乙醇提取物。文章首先采用高效液相色譜法對(duì)大孔樹脂的載樣量、各洗脫梯度洗脫體積進(jìn)行了確定，并根據(jù)HPLC檢

4、測(cè)結(jié)果將洗脫液合并。其次確定了硅膠層析的洗脫梯度及洗脫體積，最后將硅膠層析得物采用HPLC半制備得到了高純度的化合物。試驗(yàn)結(jié)果表明:D-101大孔樹脂的最佳上樣量為3 BV，純水、20％乙醇、50％乙醇、80％乙醇的洗脫梯度依次為2 BV、6BV、2 BV、2 BV;其中50％-80％乙醇洗脫段的物質(zhì)最適宜的硅膠洗脫梯度為二氯甲烷∶甲醇∶水洗脫比例依次為8∶1∶0.1，7∶1∶0.1，5∶1∶0.1，3∶1∶0.1，2∶1∶0.1，0∶

5、1∶0.1及1％的甲酸甲醇溶液。洗脫體積為1 BV，3 BV，2 BV，2BV，1 BV，1 BV，1 BV;通過HPLC從50％-80％乙醇洗脫段中制備得到9種化合物。
　　3) D-101大孔樹脂乙醇50％-80％洗脫部分提取物結(jié)構(gòu)鑒定。
　　本試驗(yàn)首先利用高效液相色譜法對(duì)制備得到的9種化合物進(jìn)行純度檢驗(yàn)，然后采用LC-QTOF-MS和NMR（1H-NMR、H-H COSY、13C-NMR、DEPT-135、HSQC、H