LDL受體功能檢測方法在診斷家族性高膽固醇血癥中的應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　家族性高膽固醇血癥(familial hypercholesterlolemia,FH,MIM143890)是一種常見的常染色體單基因顯性遺傳性疾病,多由 LDL-R基因突變引起。早發(fā)冠心病人中5-10％是FH患者,早期診斷FH患者對冠心病的防治具有重要意義。本文旨在初步探討細(xì)胞LDL-R功能檢測在診斷FH患者中起到的作用,為建立一種早期診斷FH患者的方法奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　以雙色熒光流式細(xì)胞術(shù)檢測

2、淋巴細(xì)胞LDL-R功能的方法為基礎(chǔ),建立外周血B淋巴細(xì)胞LDL-R功能的檢測方法。入選30例FH疑似患者為實(shí)驗(yàn)組,20名正常人為正常對照組,對其進(jìn)行常規(guī)體格檢查、血脂測定和遺傳學(xué)調(diào)查等臨床資料的收集;運(yùn)用已建立好的功能檢測方法對研究對象進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞LDL-R功能的檢測,以正常對照組為標(biāo)準(zhǔn)判斷實(shí)驗(yàn)組各患者是否存在功能差異;根據(jù)其功能差異情況初步確定FH患者LDL-R基因突變的可疑功能域;從中選取4名存在同樣可疑功能域的患者(實(shí)驗(yàn)組6

3、號、7號、17號、25號),應(yīng)用核苷酸序列分析技術(shù)分析相應(yīng)的功能域確診這4名患者的基因突變類型,確診FH患者。
　　結(jié)果：
　　已建立外周血B淋巴細(xì)胞表面LDL-R的功能檢測方法,得出最適DIL-LDL濃度(每100ul細(xì)胞懸液加入DIL-LDL抗體為1ul)和最適反應(yīng)時(shí)間(1小時(shí)),并采用溶血素法獲得淋巴細(xì)胞;運(yùn)用該方法成功進(jìn)行了30名FH疑似患者LDL-R功能的檢測,發(fā)現(xiàn)部分患者與正常人相比存在功能差異;運(yùn)用該方法確診部

4、分實(shí)驗(yàn)組患者為FH:實(shí)驗(yàn)組6號是LDL-R基因第428位和第1744位堿基發(fā)生錯(cuò)義點(diǎn)突變的FH復(fù)合雜合患者;實(shí)驗(yàn)組7號是LDL-R基因第428位堿基發(fā)生錯(cuò)義點(diǎn)突變的FH雜合患者;實(shí)驗(yàn)組17號是LDL-R基因第1744位堿基發(fā)生錯(cuò)義點(diǎn)突變的FH雜合患者;25號是LDL-R基因第601位堿基發(fā)生錯(cuò)義點(diǎn)突變的FH純合患者。
　　結(jié)論：
　　本文建立的外周血B淋巴細(xì)胞表面LDL-R的功能檢測方法在診斷FH中起到初步篩查患者的作用,并