DAB2IP檢測方法的建立及在不同臨床中醫(yī)證型肺癌中的應(yīng)用.pdf

1、目的:研發(fā)DAB2IP蛋白的熒光免疫層析檢測試劑盒，探討不同中醫(yī)證型肺癌與DAB2IP蛋白表達量的相關(guān)性。
　　方法:應(yīng)用B細胞雜交瘤技術(shù)建立分泌抗人DAB2IP單克隆抗體的雜交瘤細胞株;采用鼠源性單克隆抗體亞型檢測試劑盒鑒定單抗的亞類;體內(nèi)誘生腹水法制備單抗;免疫親和層析法純化抗體;Western blot分析抗體特異性;熒光免疫層析法研制DAB2IP熒光免疫試劑盒;在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用DAB2IP熒光免疫試劑盒檢測不同臨床中醫(yī)證型

2、肺癌中DAB2IP蛋白的表達。
　　結(jié)果:獲取兩株穩(wěn)定分泌抗人DAB2IP單抗的雜交瘤(2A4、2G8);鼠源性單克隆抗體亞型檢測試劑盒鑒定2A4、2G8細胞株均屬小鼠IgGl亞類;經(jīng)體內(nèi)誘生腹水法制備單抗，小鼠腹水形成的陽性率為95％以上，腹水的收獲量平均為5.0ml/只小鼠;經(jīng)免疫親和層析法純化后的抗體跑膠結(jié)果顯示其分子量約為150kD;Western blot顯示2A4單抗能與蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)，特異性良好;成功研制DAB2

3、IP分子的熒光免疫層析檢測試劑盒，靈敏度為1ng/ml，精密度為6.08％，線性范圍在1.00-500.00ng/mL，提示該檢測系統(tǒng)具有良好的靈敏度、精密性和準(zhǔn)確性。應(yīng)用該試劑盒檢測不同臨床中醫(yī)證型肺癌中的DAB2IP分子的表達量，顯示氣陰兩虛組與其它組間差別有顯著性(P＜0.05)，具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:本研究成功制備了具有自主知識產(chǎn)權(quán)的兩株抗人DAB2IP單抗和DAB2IP熒光免疫層析檢測試劑盒。該試劑盒通過對血清