胸腺素β-4對(duì)大鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：觀察梯度濃度胸腺素β4（Thymosin-β4）對(duì)大鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）生物學(xué)行為的影響，為改善EPCs移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷這一策略的有效性，推動(dòng)EPCs移植為主體的治療手段在臨床中的應(yīng)用提供更為廣泛的思路。
　　方法：SPF級(jí)SD大鼠90～100 g，雌雄不拘，采用密度梯度離心法分離大鼠骨髓源性單個(gè)核細(xì)胞，接種于鼠纖維連接蛋白（FN）預(yù)先包被過(guò)夜的24孔培養(yǎng)板中，以含有10％胎牛血清（FBS）的EGM-2完

2、全培養(yǎng)基培養(yǎng)，隔日換液，7d后行細(xì)胞形態(tài)學(xué)及免疫細(xì)胞化學(xué)雙抗體熒光檢測(cè)（CD133及 VEGFR-2），激光共聚焦顯微鏡觀察并記錄拍照，同時(shí)行Dil標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍准爱惲蚯杷釤晒馑厍G豆凝集素-1（Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1）熒光檢測(cè)吞噬實(shí)驗(yàn)，激光共聚焦顯微鏡觀察并記錄拍照，進(jìn)一步鑒定目的細(xì)胞為內(nèi)皮祖細(xì)胞。設(shè)置梯度濃度的Tβ4（1000 ng/ml、100 ng/ml、10 ng/ml、1 ng/ml）條件培養(yǎng)基分

3、別處理EPCs，分別采用CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、粘附能力實(shí)驗(yàn)以及Transwell細(xì)胞遷移能力實(shí)驗(yàn)以觀察EPCs的增殖能力、粘附能力及遷移能力的變化。同時(shí)在統(tǒng)一濃度（1000 ng/ml）下干預(yù)不同時(shí)間（24 h、48 h、72 h）后以上述同樣的方法分別進(jìn)行細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)以觀察EPCs的增殖能力及遷移能力的變化。
　　結(jié)果：Tβ4能夠顯著增強(qiáng)體外培養(yǎng)EPCs的增殖、遷移和黏附能力，并且呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，在1000 ng/m

4、l條件培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)其增殖、遷移及黏附能力均得到顯著增強(qiáng)（與對(duì)照組相比, P<0.05）。在1000 ng/ml條件培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)隨著干預(yù)時(shí)間的逐漸推移，各時(shí)間點(diǎn)的 EPCs增殖能力均顯著增強(qiáng)且優(yōu)于空白對(duì)照組（P<0.05）；黏附能力在48 h達(dá)到最大效應(yīng)（與對(duì)照組相比, P<0.05）。
　　結(jié)論：Tβ4可顯著增強(qiáng)體外培養(yǎng)的大鼠骨髓源性EPCs的生物學(xué)活性，并且呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，1000 ng/ml Tβ4條件培養(yǎng)基下預(yù)處理4