?；撬徜\對(duì)染汞大鼠神經(jīng)元及學(xué)習(xí)記憶能力的保護(hù)作用.pdf

1、目的 汞是強(qiáng)神經(jīng)毒物，?；撬岷弯\對(duì)腦發(fā)育有重要調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀測(cè)補(bǔ)充?；撬徜\(TZC)對(duì)染Hg大鼠皮層和海馬一氧化氮合酶(NOS)活力、神經(jīng)元型一氧化氮合酶(nNOS)蛋白和基因表達(dá)的影響，以及觀察在體外培養(yǎng)皮層神經(jīng)元時(shí)，TZC對(duì)染Hg大鼠神經(jīng)元生長(zhǎng)活力及突起長(zhǎng)度的影響，研究TZC拮抗Hg對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)損害的機(jī)理。 方法 選用雄性健康(出生后21d)Wistar大鼠60只，體重(200±20)g，隨機(jī)分為對(duì)照組、染汞組、汞

2、低?；撬徜\組和汞高?；撬徜\組；分別飲用蒸餾水，4.3mg/kg·dHgCl2飲水，4.3mg/kg·dHgCl2飲水和0.23g/LTZC飲水，4.3mg/kg·dHgCl2飲水和0.46g/LTZC飲水，每組15只大鼠。喂養(yǎng)75天時(shí)，用Y-迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)記憶能力；喂養(yǎng)90天時(shí)，用NADPH-d組織化學(xué)、nNOS免疫組織化學(xué)方法分別測(cè)定大鼠海馬NOS活力、nNOS蛋白和基因表達(dá)。成年雄性健康昆明系小鼠20只，體重(20±2.0)g

3、，隨機(jī)分為對(duì)照組、小劑量氯化汞組、更小劑量氯化汞組和小劑量氯化汞+?；撬徜\組；每組5只，隔天一次對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射HgCl2(0.1mg/mL,0.05mg/mL)，按10ml/kg體重注射；4小時(shí)后注射等劑量的TZC(100mg/mL)。10天后取小鼠腦組織，用RT-PCR測(cè)定nNOS的基因表達(dá)水平。 通過(guò)建立皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，觀察不同濃度TZC(0.25×10-3mg/ml、0.5×10-3mg/ml、1.0×10

4、-3mg/ml、2.0×10-3mg/ml、4.0×10-3mg/ml)和不同劑量HgCl2(8×10-6mg/ml、8×10-5mg/ml、8×10-4mg/ml、8×10-3mg/ml、8×10-2mg/ml)對(duì)培養(yǎng)皮層神經(jīng)元生長(zhǎng)活力及突起長(zhǎng)度的影響。 結(jié)果 1.行為學(xué)測(cè)試結(jié)果染汞75天后，與對(duì)照組大鼠相比，單純?nèi)竟M大鼠Y-迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)會(huì)次數(shù)明顯增多(P＜0.05)。與單純?nèi)竟M相比，給予高TZC干預(yù)的染汞組大鼠Y-迷宮實(shí)

5、驗(yàn)學(xué)會(huì)次數(shù)明顯減少(P＜0.05)。 32.NADPH-d組織化學(xué)和nNOS免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果染汞90天后，與對(duì)照組相比，單純?nèi)竟M大鼠海馬結(jié)構(gòu)CA1區(qū)、CA3和齒狀回的NADPH-d和nNOS陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量都明顯增加(P＜0.05)，陽(yáng)性神經(jīng)元染色強(qiáng)度變?nèi)?，神?jīng)纖維變短。給予高TZC干預(yù)的染汞組實(shí)驗(yàn)大鼠皮層和海馬結(jié)構(gòu)CA1區(qū)、CA3、齒狀回的NADPH-d和nNOS陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)量有明顯減少(P＜0.05)，陽(yáng)性神經(jīng)元染色強(qiáng)度

6、增強(qiáng)，神經(jīng)纖維增長(zhǎng)。 3.RT-PCR結(jié)果染汞10天后，小劑量氯化汞組電泳條帶最亮，吸光度值最高，與對(duì)照組相比，其nNOSmRNA表達(dá)的相對(duì)含量明顯增多，差異有顯著性(P＜0.05)；TZC組電泳條帶相對(duì)較亮，吸光度值較高，與小劑量氯化汞組比較，其nNOSmRNA表達(dá)的相對(duì)含量相對(duì)減少，差異有顯著性(P＜0.05)；而小劑量氯化汞組比更小劑量氯化汞組小鼠鼠nNOSmRNA表達(dá)的相對(duì)含量有減少趨勢(shì)，但差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。

7、 4.皮層神經(jīng)元培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果終濃度為8×10-6mg/ml的氯化汞就能導(dǎo)致培養(yǎng)皮層神經(jīng)元生長(zhǎng)活力下降，突起長(zhǎng)度變短(P＜0.05)。隨著氯化汞終濃度的增加，對(duì)培養(yǎng)皮層神經(jīng)元的損傷作用增強(qiáng)。終濃度為0.5×10-3mg/ml的TZC即可促進(jìn)培養(yǎng)皮層神經(jīng)元生長(zhǎng)活力增加，促進(jìn)其突起生長(zhǎng)(P＜0.05)，當(dāng)TZC終濃度達(dá)到1.0×10-3mg/ml時(shí)，其促進(jìn)培養(yǎng)皮層神經(jīng)元生長(zhǎng)活力和突起生長(zhǎng)的作用達(dá)到最大，如果TZC終濃度繼續(xù)加大到2.0