金黃色葡萄球菌中sLMWDSP、sPP2C的克隆、表達及性質(zhì)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、雙特異性磷酸酶是酪氨酸蛋白磷酸酶家族中的一個新興家族，能夠使磷酸化的酪氨酸殘基和絲/蘇氨酸殘基去磷酸化。它們在有絲分裂、信號傳導(dǎo)、胞外刺激和細胞周期等通路中發(fā)揮重要作用。 我們從金黃色葡萄球菌基因文庫中克隆了兩條新的雙特異性磷酸酶，命名為低分子量的雙特異性磷酸酶sLMWDSP(lowmolecularweightdualspecificityphosphatase，Staphylococcusaureus)和蛋白磷酸酶sPP2C

2、(proteinphosphatase2C，Staphylococcusaureus)。sLMWDSP具有462個堿基，編碼的蛋白有154個氨基酸且具有一個雙特異性磷酸酶的催化結(jié)構(gòu)域。蛋白產(chǎn)物的分子量為18kDa，等電點為4.49。sPP2C具有741個堿基，編碼的蛋白有247個氨基酸且具有一個磷酸蛋白磷酸酶2C的催化結(jié)構(gòu)域。蛋白產(chǎn)物的分子量為26.1kDa，等電點為4.95。在E.coli.Rossetta中表達蛋白sLMWDSP、s

3、PP2C。高純度的sLMWDSP、sPP2C用親和層析的方法純化得到。 sLMWDSP和sPP2C的磷酸酶活性用對硝基苯磷酸pNPP(p-nitrophenylphosphate，pNPP)進行檢測，發(fā)現(xiàn)sLMWDSP的最適pH是6.7，最適溫度是35℃，且不依賴于金屬離子；而sPP2C的最適pH是11.0，最適溫度是37℃，且該酶的活性必須依賴二價的金屬離子，在二價金屬離子Mn2+存在下活性最高。磷酸酶的通用抑制劑崗田酸、ED

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