2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
　　 1.構(gòu)建鵝源金黃色葡萄球菌eap靶基因原核表達(dá)載體，并初步研究目的蛋白的免疫學(xué)活性及其應(yīng)用。
　　 2.金黃色葡萄球菌eap靶基因雙重PCR檢測(cè)方法的建立。
　　 方法:
　　 1.依據(jù)Genebank中公布的eap基因全長(zhǎng)信息，PCR擴(kuò)增內(nèi)蒙古鵝源分離株的eap基因片段，將純化回收后的目的片段克隆到pMD18-TVector載體上，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室PCR擴(kuò)增和單雙酶切鑒定，鑒定正確后測(cè)序分析。測(cè)序

2、分析正確后構(gòu)建pET28a-eap重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌E.coliBL21中。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)SDS-PAGE鑒定成功后，用Ni-NTA親和柱獲取的純化的Eap蛋白和全菌體滅活菌苗分別免疫家兔，應(yīng)用Western-blot方法檢測(cè)重組Eap蛋白的免疫活性。建立間接ELISA方法，研究目的蛋白的反應(yīng)原性。
　　 2.以金黃色葡萄球菌的eap基因?yàn)榘谢蛟O(shè)計(jì)引物，通過PCR擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)100株由臨床采集并分離的細(xì)菌。首先對(duì)臨床采集

3、的100株標(biāo)本進(jìn)行分離純化并根據(jù)生物學(xué)特性進(jìn)行大致區(qū)分。通過國(guó)際公認(rèn)的葡萄球菌特異性基因16srRNA與金黃色葡萄球菌特異性eap基因序列雙重分析法鑒定，其中有57株為目的菌。
　　 結(jié)果:
　　 1.成功構(gòu)建pET28a-eap/BL21，在pET28a(+)系統(tǒng)中成功表達(dá)了Eap融合蛋白，獲得小量純化的Eap重組目的蛋白。
　　 2.成功應(yīng)用葡萄球菌特異性基因16srRNA和金黃色葡萄球菌特異性eap基因?yàn)闄z

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