樺褐孔菌多糖與其復(fù)方抗弓形蟲(chóng)作用的比較研究.pdf

1、弓形蟲(chóng)病作為一種嚴(yán)重危害人畜健康的寄生蟲(chóng)疾病，其防治方法一直是世界研究的熱點(diǎn)課題。本研究以已被證明具有抗弓形蟲(chóng)作用的黃芩、甘草、樺褐孔菌和馬齒莧作為試驗(yàn)藥物，提取有效成分并組合成復(fù)方，通過(guò)體外體內(nèi)抗蟲(chóng)試驗(yàn)，病理學(xué)觀察及細(xì)胞因子含量的變化，比較樺褐孔菌多糖和其所組復(fù)方的抗蟲(chóng)效果，為抗弓形蟲(chóng)藥物的開(kāi)發(fā)利用提供理論及試驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：分別提取甘草、黃芩的醇提物及樺褐孔菌和馬齒莧中的多糖，含量測(cè)定后，進(jìn)行體外體內(nèi)抗蟲(chóng)試驗(yàn)。體外試驗(yàn)：弓

2、形蟲(chóng)感染正常 vero細(xì)胞建立體外感染模型，利用MTT法進(jìn)行單藥及不同組方的細(xì)胞毒性試驗(yàn)及抗蟲(chóng)試驗(yàn)，通過(guò)細(xì)胞增殖率的比較，確定4種藥物提取物體外抗蟲(chóng)效果，篩選出體外抗蟲(chóng)的最佳組方；體內(nèi)試驗(yàn)：弓形蟲(chóng)感染健康小鼠建立體內(nèi)感染模型，根據(jù)體外試驗(yàn)結(jié)果，與樺褐孔菌多糖比較，通過(guò)存活率和存活時(shí)間比較，篩選出提取物不同組合的最佳組方及治療劑量；通過(guò)病理組織切片、免疫組化及透射電鏡，觀察藥物治療后，感染弓形蟲(chóng)小鼠主要臟器的病理變化；應(yīng)用ELASA法檢測(cè)

3、治療前后細(xì)胞因子伽馬干擾素（IFN-γ）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）和白細(xì)胞介素-8（IL-8）的水平變化。
　　結(jié)果：提取物含量測(cè)定：甘草醇提物中總黃酮含量為13.4％，黃芩醇提物總黃酮含量1.8%，馬齒莧多糖含量為81.6%，樺褐孔菌多糖含量為81.2%。體外試驗(yàn)：甘草和黃芩醇提物表現(xiàn)了較好的體外抗蟲(chóng)作用，甘草和黃芩復(fù)方組、4種提取物復(fù)方組抗蟲(chóng)作用最佳，24 h、48 h的細(xì)胞增殖率均高于陽(yáng)性蒿甲醚組。體內(nèi)抗蟲(chóng)試驗(yàn)：4種提取物

4、復(fù)方中劑量組的存活率最高，且存活時(shí)間最長(zhǎng)，平均存活天數(shù)和最長(zhǎng)存活天數(shù)分別為9.9d和13 d，長(zhǎng)于樺褐孔菌多糖對(duì)照組的9.1 d和11 d，顯示了良好的治療效果，各提取物的最佳劑量為中劑量；體外、體內(nèi)抗蟲(chóng)試驗(yàn)結(jié)果表明，4種提取物的組方為最佳組方。病理組織切片、免疫組化觀察結(jié)果表明，同一天相比較，復(fù)方組病理?yè)p傷稍輕于樺褐孔菌多糖組，復(fù)方組臟器內(nèi)弓形蟲(chóng)蟲(chóng)體量少于樺褐孔菌多糖組，明顯少于模型組。透射電鏡結(jié)果顯示，復(fù)方組和樺褐孔菌多糖組對(duì)急性感

5、染弓形蟲(chóng)小鼠肝細(xì)胞無(wú)明顯毒副作用。細(xì)胞因子水平檢測(cè)結(jié)果，復(fù)方組IFN-γ水平顯著高于其他各組(P<0.05)；復(fù)方組和樺褐孔菌多糖組感染弓形蟲(chóng)小鼠 IL-4水平明顯升高，且保持在高于感染前的水平。二者比值結(jié)果顯示，復(fù)方組升高速度較樺褐孔菌多糖組緩和，中期時(shí)又呈現(xiàn)了一個(gè)上升趨勢(shì)后回落到較低的水平，樺褐孔菌多糖組在上升后呈持續(xù)下降，并維持在較低水平；復(fù)方組與樺褐孔菌多糖組感染弓形蟲(chóng)小鼠IL-8水平比較差異均不顯著(P>0.05)，復(fù)方組和樺

6、褐孔菌多糖組在感染后第4d出現(xiàn)峰值，之后持續(xù)在相對(duì)高的水平上；感染組的值持續(xù)升高。細(xì)胞因子水平試驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)方組與樺褐孔菌多糖組在細(xì)胞因子水平的調(diào)節(jié)上表現(xiàn)了相近的效果，都起到了良好的抗弓形蟲(chóng)和保護(hù)宿主的作用。
　　結(jié)論：4種提取物均具有良好的抗弓形蟲(chóng)作用，最佳的抗弓形蟲(chóng)復(fù)方為4種提取物組方；最佳治療劑量為黃芩醇提物50 mg/10g體重、甘草醇提物25 mg/10g體重、馬齒莧多糖2 mg/10g體重、樺褐孔菌多糖2 mg/10

7、g體重；所組復(fù)方對(duì)感染弓形蟲(chóng)小鼠具有較好的保護(hù)作用，可明顯提高感染弓形蟲(chóng)小鼠的存活率，延長(zhǎng)其存活時(shí)間，減輕機(jī)體病理變化及炎癥反應(yīng)，效果好于樺褐孔菌多糖；樺褐孔菌多糖所組復(fù)方可使小鼠血清IFN-γ、IL-4、IL-8值升高到適當(dāng)水平，通過(guò)有效地調(diào)節(jié)感染弓形蟲(chóng)小鼠細(xì)胞因子水平，使Th1/Th2恢復(fù)平衡狀態(tài)，達(dá)到抗弓形蟲(chóng)，保護(hù)宿主的目的，作用效果與樺褐孔菌多糖效果相近；樺褐孔菌多糖所組復(fù)方體現(xiàn)了良好的體內(nèi)體外抗蟲(chóng)作用，且好于樺褐孔菌多糖組，發(fā)