樺褐孔菌多糖結(jié)構(gòu)及生物活性研究.pdf

1、樺褐孔菌Inonotus obliquus(Pers.:Fr.) Pilat屬擔(dān)子菌亞門(mén)、層菌綱、非褐菌目、多孔菌科、褐臥孔菌屬，在我國(guó)主要分布于黑龍江和吉林省的長(zhǎng)白山地區(qū)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道樺褐孔菌多糖具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化和降血糖等生理功能。但目前的研究主要集中在粗多糖的藥理活性上，對(duì)樺褐孔菌多糖的分離純化和結(jié)構(gòu)研究報(bào)道較少。為進(jìn)一步探討樺褐孔菌多糖活性與結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系，本文對(duì)樺褐孔菌多糖的提取、分離純化、理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)和生物活性等方

2、面進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，得到如下結(jié)論:
　　1.樺褐孔菌子實(shí)體多糖的提取工藝研究
　　通過(guò)單因素分析和正交試驗(yàn)，確定了水溶多糖與堿溶多糖的最佳提取工藝。水溶多糖的適宜提取條件為料液比1:20(w:v)、提取溫度90℃、提取時(shí)間lh，多糖得率為0.992％。提取液濃縮后醇沉的條件為提取液濃縮4倍，加3倍乙醇醇析時(shí)，多糖最大沉淀率為97.9％。
　　堿溶多糖的適宜提取條件為料液比為1:20(w:v)，NaOH濃度為0.5m

3、ol/L，提取時(shí)間為1h，乙醇濃度為85％，在此條件下樺褐孔菌堿溶性多糖的得率為0.659％。
　　2.樺褐孔菌子實(shí)體多糖的分離純化研究
　　應(yīng)用熱水煮提和乙醇沉淀的方法，獲得了樺褐孔菌多糖IOP，收率為2.67％。IOP的總糖含量為37.2％，蛋白含量為17.8％。經(jīng)氣相色譜分析，IOP中含有鼠李糖(7.59％)、葡萄糖(50.87％)、木糖(10.63％)、半乳糖(14.96％)和甘露糖(15.95％);
　　應(yīng)用

4、稀堿溶液煮提和乙醇沉淀的方法，獲得了樺褐孔菌堿溶多糖AIOP，收率為2.14％。AIOP的總糖含量為31.4％，蛋白含量為16.3％。經(jīng)GC分析得知，AIOP含有鼠李糖(8.90％)、甘露糖(5.21％)、半乳糖(13.58％)、葡萄糖(62.54％)、木糖(6.71％)和葡萄糖醛酸(3.06％);
　　建立了DEAE-纖維素和分子篩層析相結(jié)合的分級(jí)方法，對(duì)去蛋白和脫色后的樺褐孔菌多糖進(jìn)行比較系統(tǒng)的分級(jí)，獲得了七種多糖級(jí)分，其中:

5、兩種中性糖級(jí)分IOPN-I和IOPN-II;三種酸性糖級(jí)分IOPS-I-A、IOPS-I-B和IOPS-II-A;兩種堿溶多糖AIOP-I和AIOP-II，其分子量分布均一，大小在3.3x103到5.9×103之間。
　　3.樺褐孔菌子實(shí)體多糖的結(jié)構(gòu)研究
　　采用部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化和二維核磁共振等方法，對(duì)樺褐孔菌多糖中收率和純度較高的級(jí)分IOPN-I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)研究。結(jié)果表明IOPN-I主要由β構(gòu)型

6、糖苷鍵構(gòu)成，也有少量a構(gòu)型糖苷鍵;其主鏈部分主要由(1→3)-β-D-Man、(1→3，6)-β-D-GIc、(1→6)-3-O-Me-β-D-Ga1、(1→3)-a-D-Glc和(1→6)-β-D-Glc構(gòu)成;分支點(diǎn)糖殘基是(1→3，6)-β-D-GIc;(1→)-β-D-GIc形成主鏈的非還原末端;Glc構(gòu)成支鏈或主鏈邊緣的末端殘基;主鏈核心區(qū)每8個(gè)己糖殘基有1個(gè)非還原末端或1個(gè)1→6糖苷鍵。
　　4.樺褐孔菌子實(shí)體多糖的生物

7、活性研究
　　通過(guò)多糖對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)影響的實(shí)驗(yàn)表明，樺褐孔菌多糖能促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的增殖;增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能;提高巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的能力;增加NO的生成量;提高了荷瘤小鼠的免疫功能。
　　體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)表明，樺褐孔菌多糖在抑制S180腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的同時(shí)，增加了荷瘤小鼠的相對(duì)脾重、相對(duì)胸腺重以及小鼠血清中TNF-α的含量。但體外實(shí)驗(yàn)證明多糖對(duì)S180、Hela、BGC-830及HepG2細(xì)胞并沒(méi)有直接的殺傷作用，說(shuō)明樺