松褐天牛及其天敵管氏腫腿蜂氣味結(jié)合蛋白和化學(xué)感受蛋白的分子克隆與序列分析.pdf

1、本文利用掃描電鏡對松褐天牛Monochamus alternatus Hope及其寄生天敵花絨堅甲Dastarcus longulus Sharp的觸角感器超微結(jié)果進(jìn)行了觀察，并采用生物化學(xué)及分子生物學(xué)方法對松褐天牛及其寄生天敵管氏腫腿蜂Scleroderma guani Xiao et Wu的觸角氣味結(jié)合蛋白(Odorant Binding Proteins，OBPs)和化學(xué)感受蛋白(Chemosensory Proteins，CSP

2、s)進(jìn)行了分子克隆與序列分析，結(jié)果如下： 1. 利用掃描電鏡對松褐天牛觸角化學(xué)感器觀察結(jié)果表明，松褐天牛觸角上共存在著6種感受器，即毛形感受器(Ⅰ型和Ⅱ型)、Bohm氏鬃毛、錐形感受器、耳形感受器、鐘形感受器和角形感受器。對于松褐天牛觸角不同種類感器的形態(tài)、分布以及雌雄感受器在分布和數(shù)量上的差別進(jìn)行了觀察和描述描述。 2. 花絨堅甲的觸角掃描電鏡觀察結(jié)果表明，花絨堅甲的觸角上主要存在著3種感覺器，分別是毛形感覺器(Ⅰ、Ⅱ

3、和Ⅲ型)、刺形感覺器和長針形感覺器。3種毛形感覺器在雌雄兩性觸角上各節(jié)的數(shù)量分布并無明顯差異，毛形感覺器Ⅱ、Ⅲ型僅存在于觸角的最后2節(jié)，而尤其以毛形感覺器Ⅲ最為發(fā)達(dá)，其數(shù)量上占有明顯優(yōu)勢。 3. 通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，發(fā)現(xiàn)管氏腫腿蜂觸角存在三條特異蛋白條帶。根據(jù)氮端測序結(jié)果，設(shè)計兼并引物，經(jīng)YRACE和5'RACE技術(shù)獲得目的片段的全長序列。對全長序列分析表明，其中兩個蛋白為氣味結(jié)合蛋白(OBPs)，而另外一個為化學(xué)

4、感受蛋白(CSPs)，分別被命名為Sgua-OBP1，Sgua-OBP2，和Sgua-CSP1。它們分別編碼133、142和129個氨基酸殘基序列。信號肽預(yù)測結(jié)構(gòu)表明成熟肽N端序列與測序結(jié)果一致。序列比對分析顯示Sgua-OBP1和Sgua-OBP2與其他昆蟲已知的OBPs序列同源，Sgua-CSP1則與已知的昆蟲CSPs類蛋白同源。 4. 通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，對松褐天牛雌雄蟲身體各部位蛋白進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)松褐天牛雄