葡萄根瘤蚜氣味結(jié)合蛋白和化學(xué)感受蛋白的鑒定與組織分布研究.pdf

1、葡萄根瘤蚜(Daktulosphaira vitifoliae Fitch)，是全世界分布的葡萄害蟲(chóng)，也是我國(guó)重要的檢疫性生物，以若蟲(chóng)和成蟲(chóng)吸取寄主植物汁液，引起葉癭或者根瘤，嚴(yán)重危害葡萄生產(chǎn)。嗅覺(jué)功能對(duì)昆蟲(chóng)尋找寄主、選擇棲境、逃避不良環(huán)境至關(guān)重要。氣味結(jié)合蛋白(OBPs)和化學(xué)感受蛋白(CSPs)等嗅覺(jué)蛋白是昆蟲(chóng)嗅覺(jué)活動(dòng)的分子基礎(chǔ)。通過(guò)研究葡萄根瘤蚜的氣味結(jié)合蛋白和化學(xué)感受蛋白，可進(jìn)一步研究葡萄根瘤蚜和寄主植物的關(guān)系，從而為進(jìn)一步研究

2、葡萄根瘤蚜的防治提供新思路。據(jù)此，本研究利用葡萄根瘤蚜轉(zhuǎn)錄組，對(duì)葡萄根瘤蚜的氣味結(jié)合蛋白和化學(xué)感受蛋白進(jìn)行了鑒定和序列分析，研究了這些嗅覺(jué)蛋白的組織分布。研究結(jié)果如下:
　　1.從葡萄根瘤蚜轉(zhuǎn)錄組中鑒定得到7個(gè)OBPs和7個(gè)CSPs基因。分別提取葡萄根瘤蚜全蟲(chóng)、頭部和胸腹部的RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，設(shè)計(jì)特異性引物，以全蟲(chóng)cDNA為模板，通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得OBPs和CSPs基因的開(kāi)放閱讀框。PCR產(chǎn)物經(jīng)純化、克隆到PMD-19t

3、克隆載體并測(cè)序。測(cè)序結(jié)果表明，我們成功獲得了7個(gè)葡萄根瘤蚜OBPs(DviOBPs)和7個(gè)葡萄根瘤蚜CSPs(DviCSPs)的開(kāi)放閱讀框序列全長(zhǎng)。
　　2.將得到的7個(gè)DviOBPs和7個(gè)DviCSPs分別與其他蚜蟲(chóng)的OBPs、CSPs進(jìn)行序列比對(duì)。DviOBP1、DviOBP2、DviOBP3、DviOBP4和DviOBP7具有6個(gè)保守的半胱氨酸位點(diǎn)，屬于Classical家族OBPs; DviOBP5和DviOBP6在第6個(gè)

4、保守半胱氨酸位點(diǎn)下游具有一個(gè)額外的保守半胱氨酸位點(diǎn)，屬于Plus-C家族OBPs。CSPs包含4個(gè)保守的半胱氨酸殘基。這些半胱氨酸殘基與二硫鍵的形成有關(guān)，能夠穩(wěn)定CSPs的空間結(jié)構(gòu)，形成一個(gè)疏水性的空腔。
　　3.通過(guò)RT-PCR檢測(cè)了DviOBPs和DviCSPs在葡萄根瘤蚜頭部和胸腹部上的表達(dá)。結(jié)果表明，DviOBP1和DviOBP6在頭部大量表達(dá)，在胸腹部中的條帶較淺，DviOBP2、DviOBP3、DviOBP4、DviO