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文檔簡介
1、對昆蟲嗅覺機理的深入研究和嗅覺信號傳導途徑的完整闡述,是探索害蟲專一性防治的基礎。云斑天牛Batocera hotsfieldi(Hope)是我國一種主要的林木蛀干害蟲,嗅覺在其交配、尋找食物和生存場所等行為過程中起著重要的作用,深入研究云斑天牛對環(huán)境化學因子刺激的感受機制及化學感受蛋白,將為云斑天??沙掷m(xù)治理的提供新的策略。為此,本研究在利用SMART技術構(gòu)建云斑天牛觸角全長cDNA文庫并結(jié)合批量EST測序及序列分析的基礎上,運用RT
2、-PCR方法克隆獲得化學感受蛋白目的基因,并利用蛋白質(zhì)凝膠電泳技術分析了云斑天牛化學感受蛋白在其機體中的分布。主要研究結(jié)果如下:
1.用CreatorTM SMARTTM cDNA library construction kit構(gòu)建了0.3-0.6kb和0.6-1kb兩個特定片段大小的云斑天牛觸角的全長cDNA文庫,并對兩個文庫進行了質(zhì)量鑒定。結(jié)果顯示0.3-0.6kb云斑天牛觸角全長cDNA文庫的滴度為6.4x105c
3、fu/mL,庫容量為8.9x105克隆,插入片段大多在0.5-0.75kb之間,平均長度大于0.5 kb,重組率94.5%;0.6-1kb云斑天牛觸角全長cDNA文庫的滴度為4.1x106cfu/mL,庫容量為5.8x106克隆,插入片段大多在0.75-1kb之間,平均長度大于0.7kb,重組率93.2%。文庫質(zhì)量鑒定結(jié)果表明,兩個特定片段大小云斑天牛觸角全長cDNA文庫滴度、重組率符合文庫質(zhì)量要求。
2.通過對兩個云斑天
4、牛觸角的全長cDNA文庫中隨機挑取部分的單克隆測序,得到549條序列。用NCBI/GenBank/Blast、DNAMan和Vector NTI等進行序列分析,通過序列分析,獲得了3個化學感受蛋白全長基因的序列。根據(jù)獲得的一個化學感受蛋白全長基因設計特異引物,運用RT-PCR擴增得到393bp化學感受蛋白基因全長序列,推導出了131個氨基酸序列。從序列結(jié)構(gòu)和生化特性來看,云斑天?;瘜W感受蛋白基因全長序列BhoCSP1具有昆蟲化學感受蛋白
5、典型的保守序列和結(jié)構(gòu)域,即N端19個氨基酸的信號肽,序列中有4個保守的半胱氨酸位點。從同源性分析來看,云斑天牛化學感受蛋白基因全長序列BhoCSP1推導的氨基酸序列與目前報道鞘翅目唯一一種昆蟲赤擬谷盜的19種化學感受蛋白的同源性較高,BhoCSP1與赤擬谷盜的TcaCSP10、TcaCSP12同源性分別為57%、59%。BhoCSP1推導的氨基酸序列與其它30種Endopterygota昆蟲化學感受蛋白序列的同源性也較高,為21%-59
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