mTORC1活化上調LDHB表達在肝癌發(fā)生中的作用及機理研究.pdf

1、背景：在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中,信號傳導通路的異常激活非常常見。RTKs-PI3K-AKT-mTORC1信號傳遞通路控制細胞生長、增殖、存活和分化中起著重要作用。其中哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)是一種受體酪氨酸激酶效應的主要下游信號途徑。mTORC1是細胞生長和增殖的關鍵調節(jié)分子,受營養(yǎng)及能量信號的控制且對雷帕霉素(rapamycin)敏感。近年來,不斷有研究表明哺乳動物雷帕霉素蛋白復合物1(mTORC1)活化及其下游信號通路的激活

2、在肝癌的發(fā)生發(fā)展中起到非常重要的作用。但mTORC1異?；罨瘜е履[瘤發(fā)生的具體機制至今仍不甚清楚。
　　近年來,有研究發(fā)現(xiàn)LDHB在肺癌和睪丸生殖細胞腫瘤中顯著上調,提示LDHB很可能參與了這些腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。體外實驗結果顯示在敲除TSC1/TSC2后,細胞中LDHB表達明顯升高,并且在TSC1/2-mTORC1通路活化導致的腫瘤發(fā)生中 LDHB起重要的作用;并且mTORC1活化是可能通過激活STAT3來上調LDHB的表達來實

3、現(xiàn)的。因此,LDHB作為下游基因在mTORC1信號通路調節(jié)下,對肝癌發(fā)生、發(fā)展等各項生物學行為的具體影響,以及在肝癌細胞中mTORC1活化上調LDHB的具體機制需進一步研究。
　　目的：本研究主要探討LDHB作為下游基因在mTORC1信號通路調節(jié)下,對肝癌發(fā)生、發(fā)展等各項生物學行為的影響,并進一步探索在肝癌細胞中,mTORC1活化上調LDHB表達的作用和具體機制。
　　方法：通過免疫組織化學染色和Western blot方法

4、檢測肝癌組織和癌旁組織中mTORC1和LDHB的表達及其相關性。利用mTOR特異性抑制劑rapamycin處理肝癌細胞系 HepG2和SK-HeP1;利用特異性siRNA在肝癌細胞系HepG2和SK-HeP1中敲低mTOR,mTORC1特有的亞單位Raptor;用RT-PCR和Western blot方法檢測LDHB的表達情況。用STAT3的特異性抑制劑AG490處理了肝癌細胞系HepG2和SK-HeP1,Western blot檢測抑

5、制STAT3活性后能否顯著降低LDHB的蛋白表達水平。進一步檢測,轉染STAT3的特異性siRNA能否降低肝癌細胞系HepG2和SK-HeP1中LDHB的表達。MTT法測定過表達或敲低LDHB對肝癌細胞系HepG2和SK-HeP1的增殖的影響。
　　結果：在75例肝細胞癌標本中p-S6和LDHB的陽性表達率分別為80％和74.70%,癌旁組織中p-S6和LDHB的陽性表達率分別為46.7%和40%,肝癌組織中p-S6和LDHB表達

6、明顯高于癌旁組織(P<0.05)。p-S6和LDHB的表達均與腫瘤的分化程度,門靜脈栓塞有關(P<0.05),與腫瘤直徑、性別和年齡無明顯關系。p-S6和LDHB的表達有顯著相關性(r=0.238,P<0.05).Western blot分析表明肝癌組織LDHB表達升高,并且LDHB的表達水平與肝癌組織中mTORC1的活性(以p-mTOR表達水平為依據)有明顯相關性;使用RT-PCR和western blot檢測sk-hep1和hepG

7、2肝癌細胞中,rapamycin處理和siRNA敲低mTOR、Raptor抑制LDHB表達,結果顯示，LDHB表達及其LDHB的mRNA的表達明顯降低;進一步使用STAT3的抑制劑AG490和siRNA敲低sk-hep1和hepG2肝癌細胞株中的STAT3后,免疫印跡檢測結果顯示LDHB的表達明顯降低;MTT檢測結果顯示敲低LDHB,能顯著抑制sk-hep1和hepG2肝癌細胞的增殖。
　　結論：本研究發(fā)現(xiàn)LDHB在肝細胞癌組織中