MiR-375在肝癌發(fā)生中的代謝調控作用的研究.pdf

1、目的：肝癌是嚴重威脅人類健康的重大疾病，在癌癥死因中高居第3位。但是肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機制仍未闡明。關于癌癥的最新認識表明腫瘤細胞代謝變化是腫瘤的第七大特征性改變。microRNA是一類在轉錄后水平調控基因表達的小RNA分子。miR-375不僅調控機體糖代謝而且在肝癌組織中明顯低表達并發(fā)揮了重要的抑癌作用。本實驗目的旨在探索miR-375在肝癌發(fā)生發(fā)展過程的代謝調控作用。
　　方法：應用四氯化碳構建肝纖維化-肝硬化模型、二乙基亞硝

2、胺構建（DEN）構建原發(fā)性肝癌模型；免疫組織化學方法檢測模型組織蛋白表達,Taqman-PCR技術檢測組織內miR-375的表達。利用人工合成的miR-375前體RNA分子過表達miR-375，通過定量PCR和Western-Blot實驗檢測LDHA、HK2、GLUT1、PFKFB3、PKM2、G6PC、G6PD、ALDOA、PDK1、ACLY等代謝相關酶mRNA和蛋白水平的表達變化。
　　結果：成功構建了肝纖維化-肝硬化,膠原纖

3、維特異性染色（masson染色）見大量纖維組織與假小葉形成；成功構建了大鼠肝癌模型，肝組織見多個大小不等灰白色結節(jié)、HE染色鏡檢見異性增生的結節(jié)灶肝細胞體積增大，成空泡狀，異型和分裂象、結節(jié)周圍可見包膜；免疫組織化學檢測HK2基因，結果顯示HK2在正常肝組織內幾乎不表達，肝纖維化-肝硬化組織表達上調，癌結節(jié)HK2表達明顯高于周圍組織；miR-375在肝纖維化-肝硬化與肝癌模型組織內的表達明顯低于在正常肝組織內的表達。過表達miR-375