Bmi1在肝卵圓細(xì)胞擴(kuò)增及肝癌發(fā)生中的作用.pdf

1、研究目的:研究表明多梳家族成員中的Bmi1蛋白調(diào)節(jié)多種類型干祖細(xì)胞的自我更新和增殖,介導(dǎo)多種癌癥的發(fā)生。然而它在肝臟干祖細(xì)胞增殖和肝癌發(fā)生中的作用和作用機(jī)制尚未被闡明清楚。本研究旨在闡明Bmi1在肝臟再生和肝癌發(fā)生中的作用。
　　研究方法:1)利用Bmi1GFP/+基因敲入小鼠,結(jié)合DDC誘導(dǎo)肝卵圓細(xì)胞擴(kuò)增模型,確定Bmi1在肝卵圓細(xì)胞中的表達(dá)情況。2)利用Bmi1-/-基因敲除小鼠,結(jié)合DDC誘導(dǎo)肝卵圓細(xì)胞擴(kuò)增模型,確定 Bmi

2、1在肝卵圓細(xì)胞擴(kuò)增中的作用。3)利用Bmi1-/-基因敲除小鼠,結(jié)合部分肝臟切除手術(shù),確定Bmi1對(duì)肝細(xì)胞增殖的影響。4)在方法2)的基礎(chǔ)上,結(jié)合抗氧化劑NAC處理,確定ROS通路對(duì)Bmi1-/-基因敲除小鼠肝卵圓細(xì)胞擴(kuò)增的影響。5)通過Bmi1-/-小鼠和Ink4a/Arf-/-小鼠多代雜交,得到Bmi1-/-;Ink4a/Arf-/-雙基因敲除小鼠,再結(jié)合DDC誘導(dǎo)的肝卵圓細(xì)胞擴(kuò)增模型,確定Bmi1對(duì)小鼠肝卵圓細(xì)胞的影響是否通過In

3、k4a/Arf通路介導(dǎo)。6)通過高壓注射轉(zhuǎn)染方法,對(duì)Bmi1-/-小鼠轉(zhuǎn)染AKT/Ras癌基因,觀察肝癌發(fā)生是否受到抑制。
　　研究結(jié)果:1)Bmi1在肝卵圓細(xì)胞中表達(dá)。2)Bmi1+/+小鼠經(jīng)DDC誘導(dǎo)后肝卵圓細(xì)胞大量擴(kuò)增,而Bmi1基因敲除小鼠經(jīng)DDC誘導(dǎo)后不見肝卵圓細(xì)胞擴(kuò)增。因此,Bmi1是肝卵圓細(xì)胞擴(kuò)增所必須的。3)Bmi1-/-小鼠在部分肝臟切除術(shù)后不能存活,用比較兩周齡Bmi1+/+和Bmi1-/-小鼠肝細(xì)胞增殖能力的

4、方法,結(jié)果為Bmi1不影響肝細(xì)胞的增殖。4)NAC處理后,Bmi1-/-小鼠仍不見肝卵圓細(xì)胞擴(kuò)增,證明Bmi1對(duì)肝卵圓細(xì)胞的作用不由ROS通路介導(dǎo)。5)Bmi1-/-;Ink4a/Arf-/-雙基因敲除小鼠的肝卵圓細(xì)胞大量擴(kuò)增,證明Bmi1對(duì)肝卵圓細(xì)胞的擴(kuò)用通過Ink4a/Arf通路介導(dǎo)。6)通過高壓注射轉(zhuǎn)染AKT/Ras,Bmi1+/+小鼠在4-6周內(nèi)發(fā)展成肝卵圓細(xì)胞來源的肝細(xì)胞肝癌和膽管癌混合型肝癌,但 Bmi1-/-小鼠在8周后仍