人結腸癌細胞中雌激素受體β與mTORC1和mTORC2通路的關系研究.pdf

1、背景與目的：
　　雌激素受體（ER）β對人結腸癌的防護起主導作用。它能抑制結腸癌SW480細胞增殖和移植瘤的生長，但具體作用機制不明。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是一種絲/蘇氨酸激酶，由兩種功能復合物組成，mTORC1（對雷帕霉素敏感）和mTORC2（對雷帕霉素不敏感），調節(jié)細胞的生長和代謝。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，ERβ對mTOR有負向調節(jié)作用。本研究旨在進一步探討ERβ與mTORC1和mTORC2信號通路的關系。
　　

2、方法：
　　以人結腸癌細胞株HCT116（p53野生型,雷帕霉素敏感細胞）和SW480（p53突變型，雷帕霉素耐藥細胞）為研究對象。在ERβ質粒轉染前后，通過熒光顯微鏡觀察細胞的自噬現(xiàn)象；采用 CCK-8法檢測細胞增殖的變化；蛋白印跡法檢測LC3-II蛋白、mTOR、Rictor、Akt、AMPK和p70S6K蛋白以及相應磷酸化蛋白的表達變化；實時定量PCR法檢測DRAM1、Sestrin1和Sestrin2的mRNA表達變化。觀

3、察SW480細胞轉染ER?質粒后，聯(lián)用ER激動劑Biochanin A與否對磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表達的影響。
　　結果：
　　與在HCT116細胞中的效應相似，ERβ在SW480細胞內過表達后，不需ER激動劑也能明顯下調p-mTOR的表達。ER?過表達能抑制人結腸癌 HCT116和 SW480細胞的增殖并促進其發(fā)生自噬。LC3-II和p-AMPK蛋白在HCT116細胞中分別上調了2.81倍和1.80倍（P<0.

4、05）；在 SW480細胞中分別上調了1.70倍和2.48倍（P<0.05）。p-mTOR、p-p70S6K、Rictor和p-Akt蛋白的抑制率在HCT116細胞分別下降29.52％、34.54%、33.93%和46.68%，在SW480細胞分別下降37.89%、41.86%、52.13%和27.31%。除了Sestrin1 mRNA在SW480細胞中的表達無明顯變化外，DRAM1和Sestrin2 mRNA的表達量在兩種細胞中都有顯