結(jié)腸癌中骨橋蛋白與環(huán)氧化酶-2的相關(guān)性及臨床意義的研究.pdf

1、消化道腫瘤的發(fā)病率逐漸成上升趨勢(shì)，結(jié)直腸癌的發(fā)病率在各種消化道腫瘤中已升至第2位。由于早期缺乏典型的癥狀和體征，給診斷帶來(lái)一定的困難，臨床上就診的大部分患者屬于中、晚期結(jié)腸癌，多失去手術(shù)機(jī)會(huì)。結(jié)腸癌患者的主要死因是腫瘤復(fù)發(fā)及肝臟轉(zhuǎn)移，因此早期認(rèn)識(shí)結(jié)腸癌有無(wú)轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)移途徑以及轉(zhuǎn)移范圍對(duì)于指導(dǎo)臨床治療、提高結(jié)腸癌患者的預(yù)后具有重要意義。近年來(lái)，非細(xì)胞毒性藥物在腫瘤治療中的作用備受關(guān)注，其中COX-2抑制劑抑制腫瘤生長(zhǎng)的研究已取得較大進(jìn)展。塞

2、來(lái)昔布是一種高選擇性的COX-2抑制劑，對(duì)COX-2的抑制強(qiáng)度為COX-1的375倍，與非選擇性的COX-2抑制劑相比，胃腸道出血等不良反應(yīng)的發(fā)生率明顯降低。
　　COX是花生四烯酸代謝中的重要限速酶，分為兩種異構(gòu)體:COX-1和COX-2。COX-1在大多數(shù)細(xì)胞和組織中穩(wěn)定表達(dá)，主要起維持正常生理功能的作用。而COX-2是一種可以誘導(dǎo)表達(dá)的酶，在大多數(shù)正常組織中表達(dá)呈陰性，當(dāng)細(xì)胞受損傷或其他刺激的情況下可大量增加。COX-2與人

3、類多種腫瘤密切相關(guān)，參與調(diào)控腫瘤發(fā)生和發(fā)展的多種機(jī)制。它可以抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制宿主的免疫應(yīng)答，逃避對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視，并可促進(jìn)腫瘤血管生成及腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。
　　人OPN基因是單一編碼基因，位于染色體4q13上。Yeatman等在綜合研究新的有關(guān)腫瘤和腫瘤進(jìn)展的標(biāo)志物時(shí)，通過(guò)應(yīng)用基因表達(dá)圖譜技術(shù)篩選大約12000個(gè)基因，最終確定OPN為臨床上結(jié)腸癌首選的生物學(xué)標(biāo)記。OPN與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，它可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的趨化、粘

4、附，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解，促進(jìn)腫瘤血管的形成。OPN的過(guò)表達(dá)與肝癌、乳腺癌、胃癌等腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移、早期復(fù)發(fā)等有關(guān)。對(duì)OPN的研究逐漸成為腫瘤治療的一個(gè)熱點(diǎn)。
　　目前選擇性COX-2抑制劑抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡是腫瘤學(xué)專家們關(guān)注的研究領(lǐng)域之一，一些學(xué)者已進(jìn)行了富有成效的探索，但選擇性COX-2抑制劑抗結(jié)腸癌的確切分子機(jī)制至今尚不十分清楚。本課題研究選擇性COX-2抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)HT-29結(jié)

5、腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及相關(guān)的分子機(jī)制，為塞來(lái)昔布抗結(jié)腸癌的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　第一章:結(jié)腸癌中骨橋蛋白與環(huán)氧化酶-2的表達(dá)及臨床意義
　　目的：研究骨橋蛋白(OPN)與環(huán)氧化酶-2(COX-2)在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)水平，并探討兩者與結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)的關(guān)系。
　　方法：應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)60例結(jié)腸癌組織和16例癌旁正常組織中OPN與COX-2的表達(dá)，并分析二者的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系及二者的表達(dá)相關(guān)性。<

6、br>　　結(jié)果：
　　1.OPN和COX-2在結(jié)腸癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于癌旁正常結(jié)腸組織。
　　2.OPN和COX-2蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)，與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，二者在結(jié)腸癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：OPN和COX-2在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，聯(lián)合檢測(cè)可作為判斷結(jié)腸癌惡性程度和預(yù)后的指標(biāo)。
　　第二章塞來(lái)昔布對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞生長(zhǎng)及其骨橋蛋白表達(dá)的影響
　　

7、目的：通過(guò)觀察塞來(lái)昔布對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡及對(duì)骨橋蛋白、環(huán)氧化酶-2表達(dá)的影響，探討塞來(lái)昔布抗腫瘤的作用機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞，以不同濃度塞來(lái)昔布干預(yù)人結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29，MIT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制情況，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞的凋亡，RT-PCR和免疫組化分析細(xì)胞中的OPNmRNA、COX-2 mRNA及其蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.塞來(lái)昔布對(duì)HT-29細(xì)胞增殖有明顯的抑制作

8、用，并且抑制程度和藥物作用時(shí)間與藥物作用濃度之間存在依賴效應(yīng)。
　　2.塞來(lái)昔布能誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡，凋亡率隨藥物濃度增加而逐漸增高。
　　3.RT-RCR及免疫組化的結(jié)果顯示，藥物干預(yù)組和細(xì)胞對(duì)照組相比HT-29細(xì)胞的OPNmRNA、COX-2 mRNA及其蛋白表達(dá)下降。
　　結(jié)論：塞來(lái)昔布可能通過(guò)抑制OPN的表達(dá)，抑制結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡，OPN和COX-2之間可能存在某種復(fù)雜的關(guān)聯(lián)，具體的聯(lián)