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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究擬采用單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)的方法分析三個(gè)常見(jiàn)的突變位點(diǎn)在中國(guó)人FHM家族中的表現(xiàn)形式.以進(jìn)一步探討CACNA1A與FHM之間的關(guān)系.[材料和方法]1.研究對(duì)象:1)FHM病人組:家系A(chǔ)三代共8個(gè)患者(6女,2男),其中6個(gè)參加實(shí)驗(yàn);家系B三代共4個(gè)患者(4女),均參加實(shí)驗(yàn).2)FHM親屬組:家系A(chǔ)和B共12人.3)無(wú)FHM家族史的偏頭痛病人組:共53例有先兆偏頭痛,其中男性17例,女性36例.4)健康對(duì)照組:共8名女性,2名
2、男性健康對(duì)照,年齡與FHM相匹配.5)以上所有患者均根據(jù)國(guó)際頭痛學(xué)會(huì)(International Headache Society,IHS,1988年)分為無(wú)先兆的偏頭痛(Migraine without aura)和有先兆的偏頭痛(Migraine with aura)[1].2.實(shí)驗(yàn)方法:2.1.引物的設(shè)計(jì)合成:應(yīng)用生物信息學(xué),從Genebank中查閱CACNA1A基因的mRNA和第13、16、17外顯子的序列,根據(jù)引物設(shè)計(jì)原則,并
3、利用Primer 5.0設(shè)計(jì)軟件,設(shè)計(jì)出擴(kuò)增13、16和17外顯子的引物.設(shè)計(jì)的引物均位于各個(gè)外顯子相鄰的內(nèi)含子上,因此擴(kuò)增的片段包括整個(gè)外顯子序列.2.2.基因組DNA的提取:酚/氯仿抽提法.2.3.PCR擴(kuò)增CACNA1A基因的第13、16、17外顯子:第13,第16及第17個(gè)外顯子的反應(yīng)條件均為:94℃4分鐘預(yù)變性,94℃1分鐘,55℃30秒,72℃45秒,共35個(gè)循環(huán),72℃延伸6分鐘.反應(yīng)后檢測(cè),取8 u lPCR擴(kuò)增產(chǎn)物用2
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