本地毛形線蟲49ku ES重組蛋白單克隆抗體的制備與鑒定.pdf

1、旋毛蟲病是一種嚴重的人獸共患寄生蟲病，其分布幾乎遍及全球各地。該病不僅嚴重危害人體健康，而且還給畜牧業(yè)及食品工業(yè)帶來重大的經濟損失，所以及時準確的診斷并治療旋毛蟲病顯得至關重要。 鑒于旋毛蟲病的危害性，研制敏感性高、特異性強的旋毛蟲病診斷試劑和保護性高的基因工程抗體，對于防治旋毛蟲病有重要的實際意義。本研究選用pET-30a表達載體表達本地毛形線蟲49ku ES抗原，利用雜交瘤技術制備單克隆抗體，為建立檢測旋毛蟲循環(huán)抗原方法和旋

2、毛蟲病早期診斷試劑盒及基因工程抗體的研制提供理想、必備的試驗材料。 利用本地毛形線蟲49ku ES重組蛋白免疫Balb/C小鼠，取小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合，篩選分泌高滴度McAb雜交瘤細胞株，制備腹水進行純化。采用間接ELISA方法測定雜交瘤細胞上清液和小鼠腹水效價；用Southern Biotechnology Associates，Inc的SBA Clonotyping<'TM>System/AP對單克隆抗體進行亞類鑒定；

3、Dot-ELISA和Western blot試驗檢測單克隆抗體的特異性；間接ELISA方法檢測單克隆抗體與日本血吸蟲成蟲抗原、豬囊尾蚴囊液抗原、豬蛔蟲抗原、豬鞭蟲抗原是否存在交叉反應。結果表明：獲得兩株抗ES49ku ES重組蛋白雜交瘤細胞株，分別命名為D5和C1；兩株雜交瘤細胞上清液和腹水效價均達到1∶1280和1∶12800；均能穩(wěn)定分泌敏感性強高、特異性強高的IgM類McAb，輕鏈為к鏈；兩株單克隆抗體均能特異性識別約49ku處的