花生青枯病抗性相關(guān)基因的分離及其功能分析.pdf

1、IsolationandanalysisofdifferentiallyexpressedgenesfrompeanutinresponsetochallengewithRalstoniasolanacearumThesissubmittedtoQingdaoAgricultural1rI‘Un1VerS1tVInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceDingYu

2、fei(CollegeofLifeSciences)Supervisor：WangChuantangQingdaoChinaJune，2012青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要花生青枯病抗性相關(guān)基因的分離及其功能分析摘要由Ralstoniasolanacearum引起的花生青枯病是我國(guó)花生上的一種毀滅性病害。通過輪作、化學(xué)藥劑和生物防治能夠在一定程度上預(yù)防青枯病的發(fā)生，但是這些方法浪費(fèi)土地資源，并且增加了種植成本。選育和種植抗青枯病花生品種是

3、目前最為經(jīng)濟(jì)有效的防治途徑。青枯病抗性育種主要有兩條途徑：一是對(duì)現(xiàn)有花生種質(zhì)進(jìn)行抗性鑒定，從中篩選出抗病、高產(chǎn)的品種直接加以利用；二是將現(xiàn)有抗源與當(dāng)前主栽品種雜交，轉(zhuǎn)移其抗性，培育抗青枯病新品種。但是受抗源種質(zhì)遺傳基礎(chǔ)和篩選方法的限制，傳統(tǒng)的育種手段難以滿足生產(chǎn)需要。近年來隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，花生青枯病抗性育種也朝著分子水平邁進(jìn)，分子標(biāo)記和抗性基因分離等技術(shù)的運(yùn)用有助于加速花生青枯病抗性育種進(jìn)程?；ㄉ耘喾N基因組龐大，且含有較多重復(fù)序

4、列。雖然近年來有不少關(guān)于花生青枯病抗性基因分子標(biāo)記的報(bào)道，但是這些分子標(biāo)記與抗性間的圖距較大，實(shí)用價(jià)值不大。而差異表達(dá)分析能夠在短時(shí)間內(nèi)獲得抗性相關(guān)基因，可望在育種上加以應(yīng)用。本研究主要涉及花生青枯菌的遺傳多樣性分析以及花生青枯病抗性相關(guān)基因的分離，具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：l、用SMSA培養(yǎng)基從青枯病罹病花生植株莖中分離青枯菌。具有強(qiáng)致病性的菌株在SMSA培養(yǎng)基上，形成不規(guī)則、中間為粉紅色、具有很強(qiáng)的流動(dòng)性的菌落。挑取典型菌落，并利用青

5、枯菌種特異性引物759／760對(duì)其進(jìn)行鑒定。若擴(kuò)增結(jié)果為一條280bp的單一條帶，則說明分離得到的菌是具有致病性的青枯菌菌株。本研究中共分離得到11個(gè)青枯菌菌株。2、對(duì)分離得到的青枯菌進(jìn)行生物型和遺傳型鑒定分析。根據(jù)Fegan和Prior提出的PmxPCR對(duì)分離得到的菌株進(jìn)行遺傳型分析。根據(jù)青枯菌對(duì)于三種雙糖和三種己醇的利用情況，對(duì)其進(jìn)行生物型劃分。經(jīng)分析，分離得到的11個(gè)菌株均是生物型III、遺傳型I。3、以抗青枯病花生品種日花l號(hào)和