臍帶血干-祖細(xì)胞的體外擴(kuò)增及擴(kuò)增后干-祖細(xì)胞生物學(xué)特性的研究.pdf

1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文臍帶血干祖細(xì)胞的體外擴(kuò)增及擴(kuò)增后干祖細(xì)胞生物學(xué)特性的研究姓名：翟瓊莉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：病理與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：韓忠朝邱錄貴2002.5.1薛士筍往矗立1苷要粒酶催化亞單位一一hTERTmRNA水平表達(dá)的變化，進(jìn)一步評(píng)價(jià)了擴(kuò)增后UCBHSPC的增殖和自我更新能力。／(結(jié)果：(1)本研究的培養(yǎng)體系可有效支持UCBACl33‘細(xì)胞的擴(kuò)增。經(jīng)過(guò)兩周的培養(yǎng)，從較早期的ACl33CD34、ACl33

2、CD34、HPPCFU、CFU—GEMM、ACl33及CD34細(xì)胞群，到各系定向祖細(xì)胞CFUGM和BFUE均得到持續(xù)顯著的擴(kuò)增；(2)在體外擴(kuò)增中，發(fā)現(xiàn)ACI33抗原的消失早于cD34，從ACI33／CD34細(xì)胞亞群變化推測(cè)細(xì)胞的分化過(guò)程可能是由ACl33CD34一Acl33CD34一ACt33CD34一hCl33一CD34。這一動(dòng)態(tài)增殖過(guò)程提示ACl33是比CD34更為早期的HSPC表面標(biāo)志；(3)擴(kuò)增后CD34細(xì)胞與原代CD34細(xì)胞

3、的端粒酶活性相當(dāng)或有所升高，提示本研究建立的體外培養(yǎng)體系可保持?jǐn)U增后HSPC的增殖和自我更新潛能。擴(kuò)增后HSPC在移植受體內(nèi)重建持久造血的潛能除與其增殖分化及自我更新潛能密切相關(guān)，還須具有完整的歸巢功能。由于缺乏合適的方法檢測(cè)人HSC的體內(nèi)造血潛能，體外擴(kuò)增后HSPC的功能特性至今仍未完全明了。歸巢過(guò)程包括粘附和遷移，原代HSPC粘附和趨化方面的研究已有很多報(bào)道，但有關(guān)體外擴(kuò)增對(duì)HSPC歸巢相關(guān)功能影響的體外研究還很少，對(duì)擴(kuò)增后HSPC

4、粘附和遷移功能的系統(tǒng)研究無(wú)疑將為進(jìn)一步優(yōu)化UCBHSPC的體外擴(kuò)增體系和擴(kuò)增后基于該領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀和第一部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)將CD34細(xì)胞從擴(kuò)增產(chǎn)物中再次純化出來(lái)，從動(dòng)態(tài)的角度觀察了擴(kuò)增過(guò)程中UCBCD34細(xì)胞歸巢相關(guān)細(xì)胞粘附分子(CAMs)的表達(dá)、粘附功能、趨化功能和趨化因子受體CXCR4表達(dá)的變化，從而評(píng)價(jià)細(xì)胞因子介導(dǎo)的簽叢芷燮對(duì)UCBHSPC體外歸巢相關(guān)功能的影響。(這也是本研究的創(chuàng)新之處和重點(diǎn)所在結(jié)果：(1)幾種與歸巢密切相關(guān)的粘附分子