人lif及osm轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的建立及其對(duì)臍血cd3439;造血干祖細(xì)胞體外擴(kuò)增作用的研究

1、蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文人LIF及OSM轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的建立及其對(duì)臍血CD34造血干/祖細(xì)胞體外擴(kuò)增作用的研究姓名：苗莉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：繆競(jìng)誠(chéng);楊吉成20070501人L I F 及O s M 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的建立及其對(duì)臍血c D 3 4 + 造血千衄細(xì)胞體外擴(kuò)增作用的研究 中文摘要功。R T - P c R 結(jié)果分別有約6 0 9 b p 和7 5 0 b p 特定條帶，說(shuō)明脂質(zhì)體介導(dǎo)的人L I F 和O S M基因可以在

2、人胚肺成纖維細(xì)胞w I ．3 8 中轉(zhuǎn)錄；E L I S A 結(jié)果測(cè)定表達(dá)產(chǎn)物的濃度分別為L(zhǎng) I F ：1 1 ．1 0 5 p ∥m l ，O S M ：4 9 ．5 4 7 p g ，m l ；同法鑒定逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的人L I F 和0 S M基因可以在人胚腎成纖維細(xì)胞2 9 3 T 中表達(dá)，且轉(zhuǎn)基因2 9 3 T 細(xì)胞上清中細(xì)胞因子含量比轉(zhuǎn)基因w I 一3 8 細(xì)胞上清多，分別為L(zhǎng) I F ：1 1 0 ．1 3 4 p g ／m

3、 l ，O S M ：1 5 9 ．9 8 7 p g ／m l ；表達(dá)產(chǎn)物具有相應(yīng)的天然的生物學(xué)活性，能夠分別抑制人白血病細(xì)胞H L 6 0 和人黑色素瘤細(xì)胞A 3 7 5 的生長(zhǎng)。采用免疫磁珠法分離臍帶血C D 3 4 + H s P C ，C D 3 4 + 細(xì)胞純度可達(dá)9 0 ％以上，產(chǎn)率約為4 5 ％，表面分子陽(yáng)性率分別約為C D 3 18 9 ．3 3 ％，C D 6 2 L 2 3 ．6 0 ％，C D 4 9 d 8 5

4、 ．4 ％，C D 5 47 4 ．9 ％，C x C R 47 6 ．6 ％，共培養(yǎng)7 天后，再次測(cè)定，C D 3 4 + 細(xì)胞比例均有不同程度的降低。結(jié)果顯示：培養(yǎng)液中添加細(xì)胞因子h O S M 組的C D 3 4 + 細(xì)胞比例相比未添加組高，細(xì)胞因子聯(lián)合飼養(yǎng)層組相比單純細(xì)胞因子組高，轉(zhuǎn)O S M 、L I F 基因的飼養(yǎng)層組相比未轉(zhuǎn)基因組高。研究還發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子h O S M 還可減緩臍帶血C D 3 4 + 細(xì)胞c x c R

5、4 表達(dá)的下降程度，提示0 S M 有助于保持臍血造血細(xì)胞的歸巢能力。結(jié)論：本研究建立了兩種h L I F 、h o s M 基因真核穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，表達(dá)產(chǎn)物具有相應(yīng)的生物學(xué)活性；成功構(gòu)建了重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體p E G Z ／：M C S ．H A ．h L I F 和p E G 刀M c S —H A - h o s M ；采用免疫磁珠法分離、富集到臍帶血c D 3 4 + H s P c ，純度可達(dá)9 0 ％以上；實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步顯示經(jīng)