基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1和血小板第4因子對(duì)臍帶血干-祖細(xì)胞體外擴(kuò)增及歸巢相關(guān)功能的影響研究.pdf

1、造血干細(xì)胞移植是治療白血病和淋巴瘤等惡性腫瘤、代謝性疾病、自身免疫性疾病及先天免疫缺陷等嚴(yán)重危害人類健康疾病的最有效治療方法之一。臍帶血(UCB)是繼骨髓和動(dòng)員外周血之后的另一種重要造血干細(xì)胞來源，它的優(yōu)點(diǎn)是來源充足、具有很高的增殖和擴(kuò)增潛能、采集不影響供者、受CMV和Epstein-Barr病毒污染機(jī)會(huì)小、移植后急慢性GVHD發(fā)生率低于成年供者的骨髓移植、可以建立臍血庫(kù)隨時(shí)提供移植所需要的HLA相合的干細(xì)胞。 體外擴(kuò)增的HSP

2、Cs是否具有臨床應(yīng)用價(jià)值取決于兩個(gè)方面：一、細(xì)胞保持增殖和自我更新的能力；二、細(xì)胞保持歸巢骨髓造血微環(huán)境的能力。 本實(shí)驗(yàn)室建立了一個(gè)具有臨床應(yīng)用前景的無血清無基質(zhì)擴(kuò)增體系：無血清培養(yǎng)基QBSF-60+FST(FL、SCF和TPO)，這一體系可以支持以UCBCD34+細(xì)胞為靶細(xì)胞的UCB各階段HSPCs高效擴(kuò)增，而從擴(kuò)增產(chǎn)物中再次純化CD34+細(xì)胞體外生物學(xué)特征的研究表明：該擴(kuò)增體系可使HSPCs保持長(zhǎng)期重建造血的潛能，短期體外擴(kuò)

3、增能夠保持HSPCs歸巢功能。然而，隨著擴(kuò)增時(shí)間延長(zhǎng)部分黏附分子(CD54、CD62L、CD31)和趨化因子受體CXCR-4在CD34+細(xì)胞上的表達(dá)下降，擴(kuò)增十天以后經(jīng)擴(kuò)增后的HSPCs黏附功能和遷移功能也出現(xiàn)了下降。 一、SDF-1和PF4對(duì)臍帶血CD34+細(xì)胞增殖和擴(kuò)增的影響SDF-1和PF4都是趨化因子CXC亞家族成員，已有證據(jù)表明SDF-1和PF4對(duì)造血干細(xì)胞生存、增殖有調(diào)控作用。本研究在已建立的擴(kuò)增因子FST組合中加入

4、SDF-1和PF4，應(yīng)用StemlineTMⅡ無血清培養(yǎng)基建立新的體外擴(kuò)增方案。 二、SDF-1和PF4對(duì)體外擴(kuò)增后臍帶血CD34+細(xì)胞歸巢相關(guān)功能的影響擴(kuò)增后HSPCs在移植受體內(nèi)重建持久造血的潛能除與其增殖分化及自我更新潛能密切相關(guān)，還須具有完整的歸巢功能。歸巢過程包括黏附和遷移，動(dòng)態(tài)觀察UCBHSPCs在擴(kuò)增過程中歸巢相關(guān)功能及通過優(yōu)化體外擴(kuò)增方案保持經(jīng)擴(kuò)增的UCBHSPCs的歸巢相關(guān)功能的研究還很少，對(duì)擴(kuò)增后HSPCs黏

5、附和遷移功能的系統(tǒng)研究無疑為進(jìn)一步優(yōu)化UCBHSPCs的體外擴(kuò)增體系和擴(kuò)增后HSPCs的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 結(jié)論本研究采用的無血清培養(yǎng)基StemlineTMⅡ添加早期效應(yīng)因子組合FST的懸浮培養(yǎng)體系及在此基礎(chǔ)上加入SDF-1和PF4建立的懸浮培養(yǎng)體系，能夠支持UCBHSPCs的持續(xù)有效擴(kuò)增。在擴(kuò)增體系中加入SDF-1和PF4能夠保持?jǐn)U增的CD34+細(xì)胞的黏附和遷移能力，有利于降低體外擴(kuò)增對(duì)造血干/祖細(xì)胞(HSPCs)歸巢相關(guān)功