法舒地爾對哮喘小鼠肺組織Rho激酶-1表達(dá)及氣道炎癥的影響.pdf

1、目的: 通過建立哮喘小鼠模型，觀察Rho激酶-1（ROCK-1）抑制劑法舒地爾對哮喘小鼠肺組織ROCK-1表達(dá)及氣道炎癥的影響，探討蛋白激酶ROCK-1在哮喘氣道炎癥中的作用機(jī)制。
　　 方法: 32只清潔級雌性BABL/c小鼠隨機(jī)分為4組（n＝8）：生理鹽水對照組（A組）、哮喘組（B組）、法舒地爾干預(yù)組（C組）、地塞米松（DXM）干預(yù)組（D組）。B、C、D組小鼠于第0、7、14 d給予OVA混懸液【含OVA 25 μg（Ⅴ級）

2、+Al（OH）31 mg】0.2 ml腹腔注射致敏，第21~26 d將小鼠置于25 cm ? 15 cm ? 15 cm自制霧化箱中，霧化吸入2％OVA，每天1次，每次30 min。A組在相應(yīng)時(shí)間給予等量的Al（OH）3生理鹽水致敏及生理鹽水霧化激發(fā)。每次霧化前1 h，C、D組分別給予用生理鹽水稀釋的法舒地爾（10 mg/kg）和DXM（3 mg/kg）0.2 ml腹腔注射干預(yù)，A、B組給予等量的生理鹽水腹腔注射對照。
　　 末

3、次霧化激發(fā)24 h后處死小鼠，收集支氣管肺泡灌洗液（BALF）。BALF離心后計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)及嗜酸粒細(xì)胞（EOS）數(shù)量；用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）測定BALF上清中Eotaxin、IL-5和IL-13水平；用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和免疫組織化學(xué)（IHC）法測定各組小鼠肺組織中ROCK-1 mRNA和蛋白的表達(dá)強(qiáng)度；HE染色光鏡下觀察肺組織病理變化。
　　 結(jié)果:
　　 1. 小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)及EOS

4、數(shù)量：A組為（58.26 ± 5.58）×104/ml、（0.43 ± 0.22）×104/ml；B組為（144.98 ± 12.16）×104/ml、（0.43 ± 0.22）×104/ml；C組為（89.17 ± 9.48）×104/ml、（20.21 ± 3.89）×104/ml；D組為（80.35 ± 10.20）×104/ml、（16.43 ± 2.32）×104/ml。與A組比較，B組細(xì)胞總數(shù)及EOS數(shù)量均顯著升高（P <

5、0.01）；與B組比較，C、D兩組細(xì)胞總數(shù)及EOS數(shù)均顯著下降（P < 0.01），但仍高于A組（P < 0.05）；C、D兩組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。
　　 2. 小鼠BALF中Eotaxin、IL-5及IL-13水平：A組為（9.73 ± 3.23）pg/ml、（26.17 ± 5.78）pg/ml、（125.46 ± 19.75）pg/ml；B組為（45.18 ± 7.62）pg/ml、（156.57 ±

6、 23.41）pg/ml、（428.66 ± 46.26）pg/ml；C組為（19.69 ± 4.70）pg/ml、（57.38 ± 13.77）pg/ml、（253.83 ± 27.84）pg/ml；D組為（15.47 ± 4.00）pg/ml、（45.53 ± 12.40）pg/ml、（206.59 ± 27.68）pg/ml。與A組比較，B組BALF中Eotaxin、IL-5及IL-13水平均明顯升高（P < 0.01）；與B組比

7、較，C、D兩組各指標(biāo)均顯著下降（P < 0.01），但仍高于A組（P < 0.05）；小鼠BALF中C、D兩組Eotaxin和IL-5水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），但C組IL-13水平較D組高（P < 0.01）。
　　 3. 小鼠肺組織ROCK-1 mRNA和蛋白在A組僅少量表達(dá)（0.232 ± 0.008、0.866 ± 0.097）；B、D兩組ROCK-1 mRNA和蛋白的表達(dá)量分別為0.665 ± 0.0

8、26、1.090 ± 0.064和0.653 ± 0.021、1.145 ± 0.075，與A組比較均顯著升高（P < 0.01）；C組ROCK-1 mRNA和蛋白的表達(dá)量為0.356 ± 0.020和0.977 ± 0.077，與B、D兩組比較均明顯下降（P < 0.01），但仍高于A組（P < 0.05）；B、D兩組的表達(dá)量相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。
　　 4. ROCK-1 mRNA表達(dá)量與BALF中EOS

9、數(shù)量及Eotaxin、IL-5和IL-13含量呈正相關(guān)（r =0.709，P < 0.0001；r =0.600，P < 0.0001；r =0.613，P < 0.0001；r =0.650，P < 0.0001）。
　　 結(jié)論: 過敏原誘導(dǎo)的哮喘小鼠肺組織中ROCK-1呈過表達(dá)，且與BALF中EOS數(shù)量及Eotaxin、IL-5和IL-13的水平呈正相關(guān)；表明蛋白激酶ROCK-1可能在哮喘氣道炎癥中發(fā)揮重要作用，用法舒地爾抑