

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文檔簡介
1、目的:研究哺乳期磺胺間甲氧嘧啶(Sulfamonomethoxine,SMM)暴露對仔鼠內(nèi)分泌、骨骼肌和腦發(fā)育及對仔鼠探索、焦慮、認(rèn)知等行為的影響,并探討mTOR信號通路相關(guān)信號對其調(diào)節(jié)作用。
方法:ICR小鼠哺乳期以0、10、50、200 mg/kg灌胃SMM染毒,連續(xù)21 d,斷乳后其仔鼠雌、雄分籠正常喂養(yǎng)至出生后天數(shù)第63天(PND63),每周稱重1次;哺乳期內(nèi)測其體長和頭圍。部分仔鼠斷乳后即剖殺,采集血清和主要臟器,稱
2、量腓腸肌、肝臟、腎臟和大腦等臟器重量,計算其臟器系數(shù);部分仔鼠PND50開始,按照曠場、黑白巷、高架十字迷宮和Morris水迷宮順序進(jìn)行行為學(xué)實驗,實驗結(jié)束剖殺,采集血清。放射免疫法測定血清中生長激素(Growth hormone,GH),胰島素(Insulin,INS),三碘甲腺原氨酸(Triiodothyronine,T3),甲狀腺激素(Thyroxine,T4),皮質(zhì)酮(Corticosterone,COR),促腎上腺皮質(zhì)激素(A
3、drenocorticotropic hormone,ACTH)和雌激素(Estradio,E2)濃度;酶聯(lián)免疫法測定血清中胰島素樣生長因子1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)濃度;高效液相色譜法測定斷乳時血清SMM及代謝物乙?;疭MM(ACSMM)濃度;二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid,BCA)法測定腓腸肌和腦組織總蛋白含量;氨基酸分析儀測定腓腸肌和腦組織游離氨基酸水平;實時定量-
4、聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法測定腓腸肌和腦組織mTOR信號通路的基因表達(dá)水平。
結(jié)果:哺乳期SMM暴露的仔鼠,從PND1至PND63仔鼠體重各劑量組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。與對照組相比,PND7時,各劑量組體長、頭圍差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);PND14時,體長各劑量組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但高劑量組頭圍顯著降低(P<0.0
5、5);PND21時高劑量組體長和頭圍均顯著降低(P<0.05)。PND21時,與對照組相比,骨骼肌、肝臟和大腦等臟器系數(shù)各劑量組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);但低、高劑量組腎臟臟器系數(shù)顯著降低(P<0.05);高劑量組血糖和INS水平顯著降低(P<0.05);GH,T4,T3和IGF-1水平各劑量組間差異無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。PND63時,與對照組相比,中、高劑量組T4水平顯著下降(P<0.05);中、高劑量組COR和AC
6、TH水平顯著升高(P<0.05);中劑量E2水平顯著下降(P<0.05),而INS和T3水平各劑量組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
行為學(xué)實驗顯示:與對照組雄鼠比較,曠場實驗低、中劑量組中央?yún)^(qū)域時間顯著增加(P<0.01),中劑量組站立次數(shù)顯著增加(P<0.01)。與對照組雌鼠比較,曠場實驗低劑量組中央?yún)^(qū)域時間顯著增加(P<0.01),中劑量組跨越格子數(shù)增加(P<0.05);黑白巷實驗高劑量組在黑端時間增加(P<0.05)。而
7、高架十字迷宮實驗各指標(biāo)雄性和雌性仔鼠各劑量組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。Morris水迷宮實驗,與對照組比較,雄性仔鼠在第4天逃避潛伏期低、中、高劑量組顯著下降(P<0.05);雌性仔鼠的逃避潛伏期高劑量組在第2,4,5天顯著下降(P<0.05);游泳距離雌性仔鼠的高劑量組在第5天時顯著延長(P<0.05);游泳速度雌鼠的低劑量組在第3天時顯著下降(P<0.05)。
PND21時,仔鼠腓腸肌游離氨基酸,與對照組比較,中劑量
8、組的谷氨酸(Glutamic acid,Glu),甘氨酸(Glycine,Gly),丙氨酸(Alanine,Ala),瓜氨酸(Citrullinr,Cit),蛋氨酸(Methionine,Met),組氨酸(Histidine,His),鵝肌肽(Anserine,Ans)含量顯著升高(P<0.05),高劑量組的Cit和Ans含量也顯著升高(P<0.05),而低劑量組的Cit含量顯著降低(P<0.01)。PND21時,仔鼠腦組織游離氨基酸譜
9、,與對照組相比,中劑量組的?;撬?Taurine,Tau),Glu和Ans含量顯著降低(P<0.05),但是低、中劑量組的Car均顯著升高,低劑量組的Ans顯著降低(P<0.05)。PND63時,雄性仔鼠腦組織游離氨基酸譜,與對照組相比,低劑量組組的必須氨基酸含量顯著增高(P<0.05),中、高劑量組的非必須氨基酸含量顯著增高(P<0.05),而高劑量組的支鏈氨基酸顯著降低(P<0.05);中劑量組的Tau,Glu和γ-氨基正丁酸(Ga
10、mma amino butyric acid,g-ABA),顯著升高(P<0.05),高劑量組的α-氨基正丁酸(Alpha amino butyric acid,a-ABA),胱氨酸(Cysteine,(Cys)2,),異亮氨酸(Isoleucine,Ile)和酪氨酸(Tyrosine,Tyr)顯著降低(P<0.05),而高劑量組的Glu和g-ABA顯著升高的(P<0.05)。而雌性仔鼠腦組織高劑量組的His含量顯著降低(P<0.01)
11、,中劑量組的精氨酸(Arginine,Arg)顯著升高(P<0.01)。
哺乳期SMM暴露對斷乳時仔鼠腓腸肌mtor,Pi3k3ca,Pi3k3cb,Akt1,Eif4ebp1和Rps6kb1各劑量組間的表達(dá)量無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);與對照組比較,腦組織低劑量組Mtor表達(dá)量顯著下降(P<0.05),中、高劑量組Mtor表達(dá)量顯著升高(P<0.05),Pi3k3ca,Pi3k3cb和Rps6kb1表達(dá)量中、高劑量組顯著升
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