胰腺癌MR分子探針多靶點的篩選、驗證及MMP14蛋白的表達和純化.pdf

1、目的：
　　1.驗證MMP14、Survivin及Kras在胰腺癌高表達，且與胰腺炎及正常胰腺組織表達情況進行比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.構(gòu)建MMP14基因序列及質(zhì)粒載體pET-30a-mMMP14，將其導(dǎo)入大腸桿菌中構(gòu)成原核表達體系，通過IPTG誘導(dǎo)表達并純化出MMP14蛋白。
　　方法：
　　1.收集43例胰腺癌、13例胰腺炎及21例正常胰腺組織標(biāo)本進行免疫組織化學(xué)染色，分析MMP14、Survivin

2、及Kras蛋白在三種組織內(nèi)表達的程度、差異及與胰腺癌患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。
　　2.合成并優(yōu)化MMP14基因序列，構(gòu)建原核質(zhì)粒載體pET-30a-mMMP14，對其進行雙酶切鑒定，確定該質(zhì)粒載體構(gòu)建成功。再將pET-30a-mMMP14轉(zhuǎn)化至Rosetta（DE3）細胞中，以不同濃度 IPTG進行誘導(dǎo)表達，摸索適宜條件，對表達產(chǎn)物進行鎳柱層析純化。
　　結(jié)果：
　　1.顯示MMP14、Survivin及Kras蛋白

3、在胰腺癌組織中高表達，與非癌組織比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2. MMP14及Survivin蛋白的表達情況與胰腺癌患者臨床病理參數(shù)無關(guān)，Kras蛋白的表達與年齡呈正相關(guān)，年齡越大的胰腺癌患者越容易出現(xiàn)Kras蛋白的高表達。
　　3. MMP14、Survivin及Kras蛋白在胰腺炎及正常胰腺組織內(nèi)表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.通過對截短后的MMP14基因序列進行稀有密碼子優(yōu)化，得到了mMMP14序列，將其與原始

4、MMP14序列進行基因比對，發(fā)現(xiàn)相符率約為74％，達到實驗要求，遂即全基因合成原核表達載體pET-30a-mMMP14。
　　5.將pET-30a-mMMP14轉(zhuǎn)化至Rosetta（DE3）細胞后，在0.4 mm IPTG濃度，37℃條件下誘導(dǎo)4 h后可獲得高度表達的MMP14蛋白，最終經(jīng)過多次鎳柱層析純化得到了純度在80%以上的MMP14蛋白。
　　結(jié)論：
　　1. MMP14、Survivin及Kras蛋白在胰腺癌