披針新月蕨的生物活性研究.pdf

1、披針新月蕨(Abacopteris penangiana(Hook.) Ching)是金星蕨科新月蕨屬植物，在我國土家族、苗族的傳統(tǒng)醫(yī)學中有著悠久的藥用歷史。為了系統(tǒng)揭示傳統(tǒng)藥用植物披針新月蕨的生物活性，本論文主要展開了以下三方面的研究：1、披針新月蕨的藥理作用篩選；2、披針新月蕨的總黃酮質量控制；3、披針新月蕨對前列腺疾病的作用以及其機制研究。
　　1、披針新月蕨的藥理作用篩選。這一部分主要由3個小節(jié)組成：(1)對披針新月蕨體內

2、外抗炎作用進行了篩選。在體外實驗中，利用脂多糖誘發(fā) RAW264.7細胞炎癥對披針新月蕨的抗炎作用進行研究；在體內實驗中，利用棉球引起肉芽腫以及二甲苯誘導耳腫脹評價了披針新月蕨的抗炎作用。結果顯示：披針新月蕨具有抗炎的作用，且總黃酮(TFA)的抗炎活性顯著優(yōu)于總提物(AP)。
　　(2)對披針新月蕨鎮(zhèn)痛的作用進行了篩選。利用熱板實驗以及醋酸扭體實驗評價了披針新月蕨的鎮(zhèn)痛作用。實驗結果顯示：披針新月蕨具有鎮(zhèn)痛的作用，且TFA的鎮(zhèn)痛活

3、性顯著優(yōu)于AP。
　　(3)對披針新月蕨抗增殖的活性進行了篩選。選用MTT顯色評價披針新月蕨對前列腺癌細胞(PC-3)、乳腺癌細胞(MCF-7)、肝癌細胞(HepG2)以及神經母細胞瘤細胞(SH-SY5Y)的抗細胞生長的作用。結果顯示：披針新月蕨具有一定抑制腫瘤細胞增殖的作用，且TFA的作用顯著優(yōu)于AP。
　　2、披針新月蕨總黃酮的質量控制。這一部分主要由2個小節(jié)組成：(1)建立了利用紫外分光光度法(UV-Vis)檢測披針新

4、月蕨總黃酮苷含量的方法。結果表明：標準品Triphyllin A的最大吸收波長為276 nm。Triphyllin A在0.0125-0.4 mg/ml范圍內線性關系良好(R=0.9998)，且精密度，穩(wěn)定性，重復性以及加樣回收率滿足定量分析的需求。依照上述建立的含量測定方法檢測TFA中總黃酮苷的含量為69.4％。
　　(2)建立了利用高效液相色譜法(HPLC)檢測TFA指標成分含量的方法。結果表明：標準品Triphyllin A

5、在0.023-1.75 mg/ml范圍內線性關系良好(R=0.9998)；Eruberin B在0.084-2.70 mg/ml范圍內線性關系良好(R=0.9994)；Abacopterin I在0.05-1.60 mg/ml范圍內線性關系良好(R=0.9998)，且精密度，穩(wěn)定性，重復性和回收率滿足定量分析的要求。依照上述建立的化合物含量測定方法檢測TFA中化合物Triphyllin A、Eruberin B與Abacopterin

6、I的含量，其含量分別為118.6 mg/g、96.7 mg/g和53.2 mg/g。
　　3、披針新月蕨對前列腺疾病的作用以及其機制研究。本部分主要由3個小節(jié)組成：(1)評價了酸水解產物(AHT)與TFA對慢性前列腺炎的作用以及機理。本部分篩選了 AHT與 TFA對細菌(CBP)以及非細菌性(CNP)前列腺炎的作用，并對其抗 CNP的作用機制進行了研究。實驗結果顯示：AHT與TFA對細菌以及非細菌性前列腺炎有良好的改善作用。其抗C

7、NP的作用機理可以從三方面闡述：a、AHT與TFA能有效清除自由基、提高體內抗氧化酶的活性并且可以保護正常前列腺的生理活性。b、AHT與TFA調節(jié)前列腺炎癥部位的血瘀，減緩前列腺的局部充血，使腺管通暢。c、AHT與TFA調節(jié)NF-κB信號途徑，減少炎癥因子與促纖維化細胞因子的產生。
　　(2)評價了AHT與TFA對良性前列腺增生(BPH)的作用。利用去勢大鼠皮下注射丙酸睪酮誘發(fā)大鼠BPH。實驗結果顯示：AHT與TFA能夠劑量依賴性

8、的降低丙酸睪酮誘發(fā)的去勢大鼠BPH。其作用機制可能是通過降低前列腺中雙氫睪酮和生長因子的水平，并通過調節(jié)PI3K/Akt與NF-κB信號通路，緩解前列腺組織的炎癥反應、減少氧化應激和降低前列腺細胞的增殖來發(fā)揮藥理作用。
　　(3)評價了披針新月蕨黃酮類化合物抑制前列腺癌細胞(PC-3)的增殖作用以及其機制。實驗結果顯示：這其中活性最好的是化合物Abacopterin C(IC50為4.62±0.43μM)。我們對其可能存在的作用機

9、理進行了探究：a、利用 Hoechst33258染色觀察Abacopterin C誘導PC-3細胞的凋亡。利用Western blot(WB)檢測Abacopterin C對Bax與 Bcl-2細胞內水平的影響。結果顯示：Abacopterin C可以濃度依賴性地引發(fā) PC-3細胞死亡；Abacopterin C處理后可以顯著地增加Bax的水平，同時減少Bcl-2的水平；b、利用 WB檢測 Abacopterin C對炎癥相關因子含量水