低脂飲食-他汀干預(yù)對不同月齡APP-PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠行為學(xué)和腦內(nèi)Aβ病理的影響.pdf

1、目的：探討低脂/他汀干預(yù)對不同月齡段APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠行為學(xué)及腦內(nèi)Aβ病理學(xué)的影響。
　　方法：選取2月齡的APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因AD模型小鼠35只（體重約20-25g）,根據(jù)干預(yù)的方法和干預(yù)啟動(dòng)的時(shí)間，隨機(jī)分為空白對照組、中年低脂組、中年他汀組、老年低脂組、老年他汀組，每組7只共五組。其中中年干預(yù)組是在小鼠飼養(yǎng)至4月齡時(shí)分別給以低脂飲食、阿托伐他汀鈣含藥飼料（30mg/Kg/日）喂養(yǎng)，而老年干預(yù)組在小鼠常規(guī)飼養(yǎng)至

2、7月齡時(shí)才給以與中年干預(yù)組相同的干預(yù)，空白對照組則一直保持常規(guī)飼養(yǎng)。所有小鼠均在恒溫、晝夜間斷照明和自由進(jìn)食的條件下完成飼養(yǎng)，并定期檢測體重至9月齡。
　　統(tǒng)一宰殺前，所有小鼠均完成Morris水迷宮測試，以評估不同干預(yù)手段和不同干預(yù)時(shí)機(jī)對模型小鼠行為學(xué)的影響，觀察指標(biāo)包括逃避潛伏期、穿越隱蔽平臺的次數(shù)。小鼠采用斷頭法宰殺并獲取腦組織，并取血檢測膽固醇水平。小鼠大腦首先從中線一分為二，一半用于病理分析，另一半在分離出海馬后，并分別

3、制作成勻漿保存在-70℃，用于雙抗體夾心法ELISA定量分析海馬Aβ1-40、Aβ1-42、β分泌酶、γ分泌酶。
　　為了評估不同干預(yù)對小鼠腦內(nèi)Aβ斑塊的影響，分別采用了Image-Pro Plus6.0圖像自動(dòng)軟件測量了各組小鼠Aβ斑塊面積/組織切片面積比值和神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量，以及一種課題組前期研究報(bào)道的組織Aβ免疫活性（tissue Aβimmuno-reactivity;TAPIR）研究方法，根據(jù)TAPIR陽性斑塊的數(shù)量和著染程

4、度，將所有TAPIR結(jié)果分為TAPIR+組和TAPIR++組，用于半定量對照研究小鼠體重、Morris水迷宮測試結(jié)果、干預(yù)手段和干預(yù)時(shí)機(jī)與TAPIR結(jié)果之間的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果：整個(gè)飼養(yǎng)過程中空白組、中年他汀組各有1只小鼠非正常死亡，各組小鼠體重之間無顯著性差異。Morris水迷宮測試結(jié)果顯示，無論是逃避潛伏期，還是空間探索方面，干預(yù)組與空白組均無顯著差異。
　　ELISA法定量分別檢測海馬勻漿中的Aβ1-40、Aβ1-42以

5、及β、γ分泌酶水平，結(jié)果顯示：老年他汀干預(yù)組和老年低脂干預(yù)組的Aβ1-42水平顯著高于空白對照組（16.32±2.64 ng/ml;16.76±2.87 ng/ml;P=0.019；0.009），干預(yù)組間的t檢驗(yàn)結(jié)果提示，中年他汀干預(yù)組海馬勻漿中的Aβ1-42水平顯著低于老年低脂組（P=0.036），但各組海馬勻漿中的Aβ1-40水平均無顯著性差異（F=1.042;P=0.403）。海馬勻漿的β-和γ-分泌酶的ELISA檢測僅提示前者存

6、在組間差異（F=2.758；P=0.047），按濃度高低排序分別為老年他汀組→老年低脂組→空白組→中年低脂組→中年他汀組。
　　免疫病理染色顯示，各組小鼠的大腦切片均可見數(shù)量不一的免疫陽性斑塊。圖像自動(dòng)分析結(jié)果顯示，各組小鼠大腦皮質(zhì)及海馬區(qū)域的Aβ斑塊面積/組織面積比值之間均無顯著性差異（P=0.466;P=0.137），但中年他汀、老年低脂、老年他汀組的皮質(zhì)區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞總數(shù)均顯著高于空白組(P=0.001;0.003;0.005

7、)。TAPIR分級與小鼠體重、逃避潛伏期之間的單因素方差分析結(jié)果顯示。TAPIR++組小鼠的平均體重明顯高于TAPIR+組（F=4.44；P=0.043），雖然TAPIR++組小鼠的平均逃避潛伏期也長于TAPIR+組，但尚未達(dá)到具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的顯著性差異（F=0.886；P=0.354）。
　　結(jié)論：
　　1.無論是中年啟動(dòng)還是老年啟動(dòng)低脂飲食和他汀干預(yù)均未能顯著改善本組APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的認(rèn)知行為能力，也未顯著減少