電紡絲殼聚糖-聚乳酸神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)大鼠周圍神經(jīng)缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本課題通過電紡絲技術(shù)制備殼聚糖/聚乳酸神經(jīng)導(dǎo)管。在體外實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)其物理性能、生物相容性后，應(yīng)用電紡絲殼聚糖/聚乳酸神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)缺損。在術(shù)后不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)，通過組織學(xué)方法評(píng)價(jià)殼聚糖/聚乳酸神經(jīng)導(dǎo)管修復(fù)大鼠周圍神經(jīng)缺損的效果。
　　方法：在體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)神經(jīng)導(dǎo)管進(jìn)行掃描電鏡觀察纖維排列情況，并檢測(cè)其抗拉伸力、抗壓應(yīng)力、親水性及體外生物相容性。之后選取成年SD大鼠54只，將其隨機(jī)分成3組，每組18只。于其右側(cè)坐骨神經(jīng)做1

2、0mm缺損，然后分別用電紡絲殼聚糖/聚乳酸神經(jīng)導(dǎo)管神經(jīng)導(dǎo)管、自體神經(jīng)逆行原位移植、切除曠置，即電紡絲殼聚糖/聚乳酸神經(jīng)導(dǎo)管組（A組）、自體神經(jīng)移植對(duì)照組（B組）和切除曠置對(duì)照組（C組）。分別在術(shù)后4，8和12周，通過大體觀察、坐骨神經(jīng)功能指數(shù)檢查、電生理檢查、肌肉濕重、肌細(xì)胞橫截面積恢復(fù)率、免疫組化、有髓神經(jīng)纖維計(jì)數(shù)、透射電鏡觀察等方法，對(duì)受術(shù)大鼠神經(jīng)再生情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：隨著殼聚糖的加入，神經(jīng)導(dǎo)管的纖維排列取向更為規(guī)律而

3、一致;并且，導(dǎo)管的抗拉伸力與抗壓應(yīng)力都得到了進(jìn)一步的提高。其親水性以及體外雪旺細(xì)胞粘附、增殖能力均隨著殼聚糖的加入得到了進(jìn)一步的提高。術(shù)后無(wú)大鼠死亡或切口感染，也沒有出現(xiàn)明顯排異反應(yīng)及與手術(shù)相關(guān)的其它部位并發(fā)癥。術(shù)后3周，A組4只，B組3只，C組7只大鼠開始出現(xiàn)右側(cè)足趾紅腫、潰瘍及脫趾等現(xiàn)象。術(shù)后4周，A組可見新生神經(jīng)纖維跨過神經(jīng)缺損，神經(jīng)導(dǎo)管形態(tài)良好，新生神經(jīng)較幼稚;術(shù)后8周，再生神經(jīng)直徑變粗;術(shù)后12周，再生神經(jīng)直徑進(jìn)一步加大，新生

4、神經(jīng)無(wú)明顯粘連，表面可見豐富的毛細(xì)血管網(wǎng)。坐骨神經(jīng)功能指數(shù)比較:術(shù)后4周，3組大鼠之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);術(shù)后8周，A組優(yōu)于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），A組和B組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);術(shù)后12周，A組優(yōu)于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);A組和B組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。肌電圖檢查:術(shù)后4周時(shí)所有組都未檢測(cè)出肌電圖表現(xiàn);術(shù)后8周，A、B兩組神經(jīng)傳導(dǎo)速度相似，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.

5、05);而B組動(dòng)作電位幅度大于A組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);術(shù)后12周時(shí)，A、B兩組神經(jīng)傳導(dǎo)速度均較8周時(shí)明顯提高(p＜0.05)，A組神經(jīng)傳導(dǎo)速度平均值略高于B組，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);A、B兩組動(dòng)作電位幅度較8周時(shí)也均有明顯提高(p＜0.05)，且A組動(dòng)作電位幅度大于B組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。在小腿三頭肌濕重恢復(fù)率方面，在術(shù)后4周、8周和12周，A、B組肌肉濕重恢復(fù)率均優(yōu)于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、(p＜0.05)，但A組與B組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。肌細(xì)胞截面積方面，術(shù)后4周，三個(gè)實(shí)驗(yàn)組肌細(xì)胞截面積大致相同，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05);術(shù)后8周、12周，A、B兩組肌細(xì)胞截面積均大于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);A組與B組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。組織學(xué)觀察方面，術(shù)后4周，橫切面上A、B兩組均可見新生神經(jīng)纖維，A組新生神經(jīng)纖維數(shù)量較少，且排列紊亂、發(fā)育幼稚，而B組神經(jīng)纖維排列更為致密、規(guī)

7、律。術(shù)后8周，A組再生神經(jīng)纖維內(nèi)可見形成了大小不等的若干束，神經(jīng)纖維髓鞘化明顯;B組新生神經(jīng)纖維較A組發(fā)育更為成熟。術(shù)后12周A、B兩組均可見再生神經(jīng)纖維進(jìn)一步增多，神經(jīng)增粗，神經(jīng)發(fā)育形態(tài)較前進(jìn)一步成熟。免疫組化結(jié)果顯示，在GAP-43方面，術(shù)后4周，A組平均光密度略高于B組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。術(shù)后8周，A組平均光密度高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。術(shù)后12周，A組平均光密度高于B組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞

8、0.05)。NF-160方面，術(shù)后4周A組平均光密度略高于B組，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。術(shù)后8周、12周時(shí)，A、B兩組之間平均光密度值相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。S-100結(jié)果顯示術(shù)后4周時(shí)，A組平均光密度略高于B組，但二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。術(shù)后8周、12周，兩組平均光密度較術(shù)后4周明顯提高，B組平均光密度值略高于A組，但二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。透射電鏡觀察結(jié)果顯示，再生有髓神經(jīng)纖