5-氮雜-2’-脫氧胞苷對人膀胱癌細胞系T24細胞DBCCR1基因啟動子的去甲基化作用研究.pdf

1、目的：
　　探討DNA甲基轉移酶抑制劑5-氮雜-2’-脫氧胞苷（5-Aza-CdR）對人膀胱癌細胞株T24中DBCCR1基因啟動子甲基化狀態(tài)的影響；探討5-Aza-CdR對人膀胱癌細胞株T24中DBCCR1mRNA表達水平的影響；探討5-Aza-CdR對人膀胱癌T24細胞增殖、凋亡的影響。
　　方法：
　　1、T24細胞培養(yǎng)以及藥物處理：體外培養(yǎng)人膀胱癌細胞株 T24，傳代后，分別用含不同濃度的（0、1、4、16、64

2、umol/l）甲基轉移酶抑制劑5-Aza-CdR的RPIM1640培養(yǎng)液進行培養(yǎng)48小時。
　　2、應用甲基化特異性 PCR（MSP）檢測5-Aza-CdR處理前后T24細胞中DBCCR1基因的甲基化狀況。
　　3、PCR法檢測在不同濃度（0、1、4、16、64umol/l）5-Aza-CdR處理膀胱癌 T24細胞48小時后T24細胞 DBCCR1mRNA的表達情況；
　　4、MTS比色法檢測經不同濃度（1、4、16、

3、64umol/l）5-Aza-CdR處理48小時后人膀胱癌細胞株T24的生長抑制作用；
　　5、應用流式細胞儀檢測不同濃度（1、4、16、64umol/l）的5-Aza-CdR在處理 T24細胞48h后的凋亡變化情況。
　　結果：
　　1、MSP法檢測膀胱癌細胞DBCCR1基因啟動子甲基化結果：對照組即正常條件下培養(yǎng)的T24細胞完全甲基化，經16umol/l的甲基轉移酶抑制劑5-Aza-CdR處理48h后，T24細胞的

4、甲基化擴增條帶為陰性，而未甲基化擴增條帶為陽性。這表明膀胱癌細胞株T24中DBCCR1基因啟動子存在高甲基化，而5-Aza-CdR可逆轉 DBCCR1啟動子的高甲基化狀態(tài)為未甲基化狀態(tài)。
　　2、經不同濃度5-Aza-CdR處理膀胱癌T24細胞48小時后，DBCCR1基因的mRNA的表達與對照組相比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。隨著藥物濃度的不斷增大，T24細胞DBCCR1基因的mRNA表達不斷增多。各組之間相比較差異具

5、有統(tǒng)計學意義（Welch檢驗F=4.288,P<0.01，Dunnett T3檢驗兩兩比較，P值均<0.05）。
　　3、5-Aza-CdR對T24細胞生長有明顯的抑制作用，且各藥物處理組對T24細胞的抑制作用與對照組（藥物濃度為0）相比均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；
　　4、流式細胞儀（FITC AnnexinⅤ/PI雙染法）檢測膀胱癌細胞株T24經不同濃度5-Aza-CdR藥物處理48h后，細胞出現明顯的凋亡。與對照