5-雜氮胞苷對成人T淋巴細(xì)胞穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平的影響.pdf

1、目的：研究DNA低甲基化對穿孔素基因mRNA和蛋白表達(dá)的影響。 方法：(1)密度梯度離心分離正常成人的外周血淋巴細(xì)胞，磁珠分離CD4<'+>和CD8<'+>細(xì)胞后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，DNA甲基化抑制劑5-雜氮胞苷(5-azaC)處理。(2)分別提取DNA、RNA和蛋白質(zhì)。(3)亞硫酸氫鈉處理DNA，巢式PCR進(jìn)行擴(kuò)增、轉(zhuǎn)化入大腸桿菌，挑取克隆測序。(4)實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測穿孔素mRNA的表達(dá)，Western

2、-blot檢測穿孔素蛋白量的變化。 結(jié)果：(1)5-azaC處理后的CD4<'+>細(xì)胞和CD8<'+>細(xì)胞穿孔素mRNA和蛋白表達(dá)顯著高于未處理的CD4<'+>和CD8<'+>細(xì)胞組(P<0.05)。(2)測序結(jié)果表明5-azaC處理后的CD4<'+>細(xì)胞和CD8<'+>細(xì)胞DNA穿孔素啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化水平降低，與未處理的CD4<'+>和CD8<'+>細(xì)胞組比較(P<0.05)有顯著性差異。 結(jié)論：5-azaC處理后C