氨基胍對(duì)大鼠急性心肌缺血損傷的影響.pdf

1、心肌缺血是指心臟的血液灌注減少,導(dǎo)致心臟的供氧減少,心肌能量代謝不正常,不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài),嚴(yán)重威脅人類的身心健康,因而對(duì)于缺血心肌保護(hù)作用的研究一直是研究者們關(guān)注的課題。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床實(shí)驗(yàn)均表明,氧自由基在心肌缺血損傷的發(fā)生發(fā)展中起著十分重要的作用,清除氧自由基可促進(jìn)缺血后心肌功能的恢復(fù)和減輕缺血心肌損傷的作用。而細(xì)胞凋亡是心肌缺血損傷發(fā)病機(jī)制的又一重要環(huán)節(jié)之一。
　　 一氧化氮(Nitric Oxide,

2、NO)作為體內(nèi)的一種重要化學(xué)遞質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子,一直倍受醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。人們對(duì)其在體內(nèi)各種生理和病理過程中的調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了大量的研究,發(fā)現(xiàn)NO具有舒張血管、調(diào)節(jié)血壓、抑制心肌重構(gòu)及血小板聚集、保護(hù)心肌血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種功能;病理狀態(tài)下,NO還與多種心血管疾病的病理?yè)p傷及修復(fù)有關(guān)。近年來(lái)許多研究結(jié)果表明,NO在心肌缺血再灌注損傷中起著十分重要的作用,但關(guān)于NO在心肌缺血中的作用,仍然是一個(gè)尚存爭(zhēng)議的問題。本研究旨在通過建立大鼠急性心肌

3、缺血?jiǎng)游锬Ｐ?觀察缺血心肌中NO含量和NOS活性的變化,探討NOS抑制劑氨基胍對(duì)急性心肌缺血損傷的影響及其作用機(jī)制。
　　 第一部分急性心肌缺血大鼠一氧化氮/一氧化氮合酶的變化
　　 目的:觀察大鼠急性心肌缺血過程中NO/NOS的變化。
　　 方法:健康雄性SD大鼠(270±20g)共80只,隨機(jī)分為10組①假手術(shù)1h組:②假手術(shù)3h組;③假手術(shù)6h組;④假手術(shù)9h組;⑤假手術(shù)12h組;⑥缺血1h組;⑦缺血3h組

4、;⑧缺血6h組;⑨缺血9h組;⑩缺血12h組,每組各8只。大鼠麻醉后連接心電圖電極,記錄術(shù)前Ⅱ?qū)?lián)心電圖,消毒手術(shù)區(qū)域,結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支2分鐘后再次記錄心電圖的變化,以S-T段較術(shù)前抬高0.15mv以上作為模型成功,假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。分別于1h、3h、6h、9h和12h后Powerlab/8s多導(dǎo)生理儀記錄各組大鼠缺血末左室收縮峰壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室壓力變化速率(±dp/dtmax)、計(jì)算左室發(fā)展壓(

5、LNDP),經(jīng)頸總動(dòng)脈取血并迅速開胸取心臟,采用硝酸還原酶法檢測(cè)血清中NO的含量,一氧化氮合酶(NOS)分型試劑盒檢測(cè)心肌組織中iNOS和cNOS的活性。
　　 結(jié)果:
　　 1.假手術(shù)組大鼠LVNEDP、±dp/dtma、INDP在缺血后1h～12h之間無(wú)明顯變化。與假手術(shù)組比較,缺血1h時(shí)大鼠上述各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化,缺血3h時(shí)±dp/dtmax、LNDP明顯降低(P＜0.05或P＜0.01),INEDP明顯升高(P

6、＜0.01);此后隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng),缺血6h、9h和12h時(shí)LVDP、±dp/dtmax明顯降低,LVEDP明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 2.假手術(shù)組大鼠血清中NO含量和心肌組織cNOS、iNOS活性在缺血后1h～12h之間無(wú)明顯變化。與假手術(shù)組比較,缺血1h時(shí)大鼠血清中NO含量和心肌組織cNOS、iNOS活性無(wú)明顯變化,缺血3h時(shí)大鼠血清NO含量升高,隨缺血時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高,在9h達(dá)到高峰(P＜0.05);

7、缺血3h時(shí)大鼠心肌組織iNOS活性升高,cNOS活性降低(P＜0.05),隨缺血時(shí)間延長(zhǎng),iNOS活性逐漸升高,在6h達(dá)到高峰(P＜0.05),而cNOS活性逐漸降低,在9h達(dá)到低谷(P＜0.05)。
　　 小結(jié):大鼠缺血1h時(shí)心肌組織未出現(xiàn)明顯損傷,缺血3h至12h時(shí)均存在組織損傷,并引起內(nèi)源性NO含量及NOS活性的變化,提示NO/NOS體系可能參與急性心肌缺血的病理生理過程。
　　 第二部分氨基胍對(duì)大鼠急性心肌缺血損

8、傷心肌組織氧化應(yīng)激的影響
　　 目的:觀察氨基胍對(duì)大鼠急性心肌缺血的影響并從氧化應(yīng)激方面探討其作用機(jī)制。
　　 方法:健康成年雄性SD大鼠(270±20g)共24只,隨機(jī)分為3組,每組8只,分別為Ⅰ假手術(shù)組;Ⅱ缺血組;Ⅲ缺血+氨基胍(AG)組(100 mg/kg)。用10％的水合氯醛300mg/kg麻醉大鼠,結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支,記錄心電圖的變化,缺血+AG組(100 mg/kg)于缺血6h時(shí)腹腔注射AG,缺血組注射等容

9、量的生理鹽水,假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。各組大鼠均于缺血9h時(shí)經(jīng)頸總動(dòng)脈取血迅速開胸取心臟。采用硝酸還原酶法檢測(cè)血清中NO的含量,采用NOS分型試劑盒檢測(cè)心肌組織中cNOS、iNOS的活性;測(cè)定心肌組織中超氧化物岐化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和血清中乳酸脫氫酶(LDH)的活性。
　　 結(jié)果:
　　 1.與假手術(shù)組大鼠比較,缺血組大鼠血清中NO含量和心肌組織中iNOS活性明

10、顯升高(P＜0.01),cNOS活性明顯降低(P＜0.01)。與缺血組大鼠比較,缺血+AG組大鼠血清中NO含量和心肌組織iNOS活性明顯降低(P＜0.01),cNOS活性也有所降低,但無(wú)顯著性差異。
　　 2.與假手術(shù)組大鼠比較,缺血組大鼠心肌組織中SOD活性明顯降低(P＜0.01),MDA含量明顯升高(P＜0.01)。與缺血組比較,缺血+AG組大鼠心肌組織中SOD活性明顯升高(P＜0.01),MDA含量明顯降低(P＜0.01)

11、。
　　 3.與假手術(shù)組大鼠比較,缺血組大鼠心肌組織中GSH-Px活性明顯降低(P＜0.01),血清中LDH活性明顯升高(P＜0.01)。與缺血組比較,缺血+AG組大鼠心肌組織中GSH-Px活性明顯升高(P＜0.01),血清中LDH活性明顯降低(P＜0.05)。
　　 小結(jié):氨基胍對(duì)大鼠心肌缺血損傷有一定的保護(hù)作用,抑制iNOS活性,減少NO的生成,降低MDA的含量和LDH的活性,提高SOD和GSH-Px活性可能是其重要

12、的作用機(jī)制。
　　 第三部分氨基胍對(duì)大鼠急性心肌缺血損傷心肌組織細(xì)胞凋亡的影響
　　 目的:觀察氨基胍對(duì)大鼠急性心肌缺血組織細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法:健康成年雄性SD大鼠(270±20g)共24只,隨機(jī)分為3組,每組8只,分別為Ⅰ假手術(shù)組;Ⅱ缺血組;Ⅲ缺血+氨基胍(AG)組(100 mg/kg)。用10％的水合氯醛300mg/kg麻醉大鼠,結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支,記錄心電圖的變化,缺血+AG組(100 mg/k

13、g)于缺血6h時(shí)腹腔注射AG,缺血組注射等容量的生理鹽水,假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。各組大鼠均于缺血9h時(shí)經(jīng)頸總動(dòng)脈取血迅速開胸取心臟。采用原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,免疫組化法測(cè)定Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá),HE染色觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.與假手術(shù)組大鼠比較,缺血組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率、Bax表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分率明顯升高(P＜0.01),Bcl-2表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分率明顯降低(

14、P＜0.01)。與缺血組比較,AG組大鼠心肌細(xì)胞凋亡率、Bax表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分率明顯降低,Bcl-2表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分率明顯升高(P＜0.01)。
　　 2.HE染色光鏡觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化:假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊,著色均勻。缺血組大鼠部分區(qū)域心肌纖維橫紋不齊或消失,核偏移甚至裂解消失,有炎性因子滲出,氨基胍組大鼠也有心肌細(xì)胞變性的改變,但程度較缺血組輕。
　　 小結(jié):氨基胍可上調(diào)凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達(dá),

15、下調(diào)促凋亡蛋白Bax表達(dá),抑制細(xì)胞凋亡可能是其對(duì)缺血心肌保護(hù)作用機(jī)制之一。
　　 結(jié)論:
　　 1大鼠缺血1h時(shí)心肌組織未出現(xiàn)明顯損傷,缺血3h至12h時(shí)均存在組織損傷,并引起內(nèi)源性NO含量及NOS活性的變化,提示NO/NOS體系可能參與急性心肌缺血的病理生理過程。
　　 2氨基胍對(duì)大鼠心肌缺血損傷有一定的保護(hù)作用,抑制iNOS活性,減少NO的生成,降低MDA的含量和LDH的活性,提高SOD和GSH-Px活性可能