骨髓基質(zhì)細胞對急性淋巴細胞白血病細胞化療敏感性的影響.pdf

1、目的:探討骨髓基質(zhì)細胞及其產(chǎn)生的細胞外基質(zhì)成分和基質(zhì)細胞因子對急性淋巴細胞白血病細胞阿糖胞苷化療敏感性的影響。
　　 方法:1．構(gòu)建急性淋巴細胞白血病細胞Sup-B15-骨髓基質(zhì)細胞OP9共培養(yǎng)模型，電子顯微鏡下觀察細胞生長情況；2．實驗分組：(1)骨髓基質(zhì)細胞組：①Sup-B15與OP9共培養(yǎng)組；②Sup-B15與滅活的OP9共培養(yǎng)組；③白血病細胞Sup-B15對照組；(2)細胞培養(yǎng)液組：①Sup-B15與OP9共培養(yǎng)液組；②

2、OP9單獨培養(yǎng)液組；③Sup-B15單獨培養(yǎng)液對照組；3．通過CCK-8法觀察不同濃度阿糖胞苷(Ara-C)對每實驗組Sup-B15細胞增殖活力的影響，計算細胞生長抑制率和半數(shù)抑制濃度(IC50);4．采用流式細胞儀(FCM)檢測各實驗組Sup-B15細胞24h的凋亡率；5.Western-blot檢測各個實驗組的Sup-B15細胞中的Bcl-2蛋白表達情況，并作半定量分析。
　　 結(jié)果:1．成功構(gòu)建急性淋巴細胞白血病細胞Sup

3、-B15-骨髓基質(zhì)細胞OP9共培養(yǎng)模型，在倒置顯微鏡下觀察到，共培養(yǎng)30min， Sup-B15開始黏附于骨髓基質(zhì)細胞層，4h后達約70％;2.CCK-8法觀察到，骨髓基質(zhì)細胞組中，Sup-B15與OP9共培養(yǎng)組、Sup-B15與滅活的OP9共培養(yǎng)組的IC50分別為0.510μg/mL，、0.339μg/mL，均明顯高于Sup-B15對照組(IC50為0.091μg/mL)；在觀察不同細胞培養(yǎng)液對Ara-C細胞毒作用的抑制時發(fā)現(xiàn)，只有S

4、up-B15與OP9共培養(yǎng)培養(yǎng)液組出現(xiàn)抑制作用，其IC50為0.204μg/mL，而OP9單獨培養(yǎng)液組和Sup-B15單獨培養(yǎng)液對照組的IC50分別為0.087μg/mL，0.097μg/mL。3．流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，骨髓基質(zhì)細胞組中，Sup-B15與OP9共培養(yǎng)組、Sup-B15與滅活OP9共培養(yǎng)組均明顯抑制了Ara-C的凋亡誘導效應，其凋亡率分別為6.67±2.19％，8.95±3.04％，與Sup-B15對照組(20.46±2

5、.63％)比較有顯著性差異(P＜0.05)；在不同細胞培養(yǎng)液組中，Sup-B15與OP9共培養(yǎng)液組的凋亡率為11.16±2.97％，與Sup-B15培養(yǎng)液對照組(19.25±1.57％)比較有顯著差異(P＜0.05），而骨髓基質(zhì)細胞OP9培養(yǎng)液組未能顯示出明顯抑制Ara-C的凋亡誘導效應。4.Western-blot檢測結(jié)果顯示，各個實驗組培養(yǎng)48h后Sup-B15細胞均表達Bcl-2蛋白。骨髓基質(zhì)細胞組中，Sup-B15與OP9共培養(yǎng)

6、組、Sup-B15與滅活的OP9共培養(yǎng)組Bcl-2蛋白表達升高，與Sup-B15對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）；在不同細胞培養(yǎng)液組中，Sup-B15與OP9共培養(yǎng)液組Bcl-2蛋白表達亦升高，與Sup-B15培養(yǎng)液對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；而OP9培養(yǎng)液組與Sup-B15培養(yǎng)液對照組比較差異無明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:骨髓基質(zhì)細胞OP9及其產(chǎn)生的細胞外基質(zhì)成分和基質(zhì)細胞因子等骨