ETS2在乳腺癌細胞中調(diào)控CXCR4轉(zhuǎn)錄的機制研究.pdf

1、目的:研究人紅血細胞增多癥病毒致癌基因同源體2(ETS2)對人乳腺癌細胞中趨化因子受體CXCR4表達的影響，以及ETS2調(diào)控CXCR4轉(zhuǎn)錄的分子機制。
　　方法:在MCF-7乳腺癌細胞株以及MDA-MB-231乳腺癌細胞株中，通過瞬時轉(zhuǎn)染技術，以及RNAi技術，過表達ETS2或抑制ETS2的表達。然后，分別應用RT-PCR以及ELISA檢測CXCR4 mRNA的表達和蛋白水平，熒光酶素報告基因?qū)嶒灆z測啟動子活性，ChIP實驗檢測結(jié)

2、合到CXCR4啟動子上的ETS2的量。并且，對CXCR4啟動子上的2個ETS結(jié)合位點進行突變，通過熒光報告基因?qū)嶒?，檢測突變對CXCR4啟動子活性的影響。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染了ETS2過表達質(zhì)粒的MDA-MB-231細胞和MCF-7細胞中，CXCR4的表達在mRNA水平和蛋白水平都有升高;報告基因?qū)嶒灲Y(jié)果提示，ETS2通過激活CXCR4啟動子的活性提高CXCR4的表達;通過ChIP實驗發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)染了ETS2表達質(zhì)粒的MDA-MB-23

3、1細胞和MCF-7細胞中，結(jié)合到CXCR4啟動子上的ETS2的蛋白量提高了，提示ETS2通過直接結(jié)合到CXCR4啟動子上，從而提高CXCR4啟動子的活性;利用RNA干擾技術，抑制ETS2的表達，可以顯著減弱CXCR4啟動子的活性，降低CXCR4的表達和結(jié)合到CXCR4啟動子上的ETS2的量;對CXCR4啟動子的2個ETS結(jié)合位點進行突變，熒光酶索報告基因的結(jié)果顯示，任意一個位點的突變都降低了CXCR4啟動子的活性，兩個位點的同時突變使C