用于研究cxcr4和survivin啟動(dòng)子活性的重組腺病毒構(gòu)建及其在乳腺癌細(xì)胞系的轉(zhuǎn)錄靶向性評(píng)價(jià)39;

1、天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文用于研究CXCR4和Survivin啟動(dòng)子活性的重組腺病毒構(gòu)建及其在乳腺癌細(xì)胞系的轉(zhuǎn)錄靶向性評(píng)價(jià)姓名：李曉霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：姚智;王寶利20070601天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文—摘要化因子受體C X C R 4 是一個(gè)具有3 5 2 個(gè)氨基酸且高度保守的與G 蛋白偶聯(lián)的七次跨膜受體，目前已報(bào)道至少2 3 種不同的惡性腫瘤細(xì)胞表達(dá)C X C R 4 。M u l l e r 等報(bào)道乳腺癌細(xì)胞

2、系和乳腺癌組織均高度表達(dá)C X C R 4 ，同時(shí)證實(shí)C X C R 4 與其配體C X C L l 2 ( S D F ·1 ) 共同作用的生物軸在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。而S u r v i v i n是近年發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋( i n h i b i t o r o f a p o p t o s i sp r o t e i n s ，l A P ) 家族的新成員，由1 4 2 個(gè)氨基酸組成，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋

3、亡抑制因子，組織分布特征具有明顯的細(xì)胞選擇性，僅在胚胎細(xì)胞和多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)特別是乳腺癌、胰腺癌、食管癌、原發(fā)性惡性膠質(zhì)瘤及卵巢癌，而在成人正常組織中不表達(dá)。目前，已有研究證實(shí)C X C R 4 啟動(dòng)子在腎癌和黑色素瘤中呈現(xiàn)腫瘤特異性，而S u r v i v i n 也作為T(mén) S P 在神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝癌和胃癌中表現(xiàn)了良好的應(yīng)用前景。因此，本文的研究重點(diǎn)即評(píng)價(jià)并比較重組腺病毒系統(tǒng)中C X C R 4 和S u r v i v i n

4、啟動(dòng)子在乳腺癌細(xì)胞系的轉(zhuǎn)錄靶向性，具有重要的實(shí)際意義和臨床價(jià)值。首先，我們通過(guò)熒光定量P C R 法檢測(cè)不同生物學(xué)性狀的乳腺細(xì)胞系中C X C R 4 和S u r v i v i n 的m R N A 水平的表達(dá)，結(jié)果表明，相對(duì)于乳腺上皮H B L l 0 0細(xì)胞，C X C R 4 和S u r v i v i n 基因在乳腺癌細(xì)胞系均為高度表達(dá)( PM C F 7 > T - 4 7 D M D A ．M B - 4 3 5

5、 > H B L l o o ，其中高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系M D A - 咖B ．2 3 1 的表達(dá)水平較其它細(xì)胞顯著升高( P0 ．0 5 ) 。S u r v i v i n 在各細(xì)胞的m R N A 表達(dá)水平依次為：T 4 7 D > M D A - M B - 4 3 5 > M C F 7 > M D A - M B - 2 3 1 > H B L l 0 0 。在乳腺癌細(xì)胞M C F 7 和M D A

6、- M B - 4 3 5 之間無(wú)明顯差異( P > O ．0 5 ) 。其中腺癌M C F 7 和導(dǎo)管癌M D A - M B - 4 3 5 之間無(wú)明顯差異( P > O ．0 5 ) ，但導(dǎo)管癌T 4 7 D 和M D A - M B - 4 3 5 之間，腺癌M C F 7 和M D A ．M B 一2 3 1 之間卻有明顯差異( P < O ．0 5 ) 。因此得出結(jié)論，C ×c R 4 與乳腺癌的

7、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而S u r v i v i n 是一個(gè)獨(dú)立于乳腺癌病理類(lèi)型的指標(biāo)，二者在乳腺癌細(xì)胞系的高度表達(dá)，提示二者作為腫瘤治療靶點(diǎn)的可能性。繼而，采用套式P C R 方法擴(kuò)增C X C R 4 和S u r v i v i n 啟動(dòng)子，將其分別克隆到含有報(bào)告基因增強(qiáng)綠色熒光蛋白( E G F P ) 的質(zhì)粒載體p E G F P ．1 和含有熒光素酶( L u e i f e r a s e ) 的質(zhì)粒載體p G L 3 一B a