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1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Nanog在人乳腺癌細(xì)胞中的功能研究姓名:韓敬華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):基礎(chǔ)醫(yī)學(xué);生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:牛瑞芳;張飛2012-05天津醫(yī)科人學(xué)碩十學(xué)位論文8 .應(yīng)用R e a l .t i m eP C R 與W e s t e r n b l o t 技術(shù)檢測(cè)N a n o g 降表達(dá)后與細(xì)胞增殖有關(guān)的蛋白C —m y c 、C y c l i n D l 、C y c l i n E 和S T A T
2、 3 的表達(dá)水平。9 .W e s t e r nb l o t 技術(shù)檢測(cè)在M C F 一7 細(xì)胞中回復(fù)N a n o g 表達(dá)水平后,C y c l i n D l 和C —m y c 表達(dá)水平。1 0 .應(yīng)用染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)檢測(cè)N a n o g 與C y c l i n D l 啟動(dòng)子的相互作用,進(jìn)一步明確N a n o g 調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。結(jié)果:1 .R e a l .t i m eP C R 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)N a n
3、 o g 的表達(dá)隨著乳腺癌組織惡性度的增高而增高,且與腫瘤組織的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及臨床分期密切相關(guān)f P < 0 .0 5 ) 。免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)隨著乳腺癌組織惡性度的增加,N a n o g 的表達(dá)強(qiáng)度也增加,各種乳腺癌組織中N a n o g 表達(dá)強(qiáng)度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P < 0 .0 5 ) 。2 .應(yīng)用R N A 干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞后篩選得到N a n o g 蛋白表達(dá)水平下降7 0 %.9
4、 0 %的3 株M C F .7 單克隆細(xì)胞。3 .N a n o g 表達(dá)水平下降后M C F .7 和M D A —M B 一2 3 1 細(xì)胞增殖能力顯著減弱( P < 0 .0 5 ) 。4 .N a n o g 基因沉默后M C F 一7 和M D A —M B .2 3 1 細(xì)胞的增殖指數(shù)下降,細(xì)胞周期G 0 /G 1 期比例升高,G 2 /M + S 期比例顯著下降( P < 0 .0 5 ) 。5 .N a n
5、 o g 表達(dá)水平下降導(dǎo)致M C F 一7 細(xì)胞克隆形成能力顯著降低( P < 0 .0 5 ) 。6 .N a n o g 表達(dá)水平下降導(dǎo)致M C F 一7 細(xì)胞增殖和腫瘤形成能力明顯降低( P < 0 .0 5 ) 。7 .體外遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明N a n o g 降表達(dá)后M C F .7 細(xì)胞的體外遷移能力顯著下降( P < O .0 5 ) 。8 .R e a l —t i m e P C R 與W e s t
6、e r nb l o t 技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)N a n o g 基因沉默后C —m y c 和C y c l i n D l 的表達(dá)水平顯著下降,而S T A T 3 和C y c l i n E 表達(dá)水平無明顯變化。9 .W e s t e r nb l o t 結(jié)果表明在M C F 一7 細(xì)胞中回復(fù)N a n o g 表達(dá)后,C y c l i n D l 表達(dá)水平也回復(fù)到正常水平。1 0 .染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)發(fā)現(xiàn)在M C F 一7 細(xì)胞
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