Nanog在人乳腺癌細(xì)胞中的功能研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Nanog在人乳腺癌細(xì)胞中的功能研究姓名：韓敬華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)；生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：牛瑞芳；張飛2012-05天津醫(yī)科人學(xué)碩十學(xué)位論文8 ．應(yīng)用R e a l ．t i m eP C R 與W e s t e r n b l o t 技術(shù)檢測(cè)N a n o g 降表達(dá)后與細(xì)胞增殖有關(guān)的蛋白C —m y c 、C y c l i n D l 、C y c l i n E 和S T A T

2、 3 的表達(dá)水平。9 ．W e s t e r nb l o t 技術(shù)檢測(cè)在M C F 一7 細(xì)胞中回復(fù)N a n o g 表達(dá)水平后，C y c l i n D l 和C —m y c 表達(dá)水平。1 0 ．應(yīng)用染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)檢測(cè)N a n o g 與C y c l i n D l 啟動(dòng)子的相互作用，進(jìn)一步明確N a n o g 調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。結(jié)果：1 ．R e a l ．t i m eP C R 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)N a n

3、 o g 的表達(dá)隨著乳腺癌組織惡性度的增高而增高，且與腫瘤組織的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及臨床分期密切相關(guān)f P < 0 ．0 5 ) 。免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)隨著乳腺癌組織惡性度的增加，N a n o g 的表達(dá)強(qiáng)度也增加，各種乳腺癌組織中N a n o g 表達(dá)強(qiáng)度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P < 0 ．0 5 ) 。2 ．應(yīng)用R N A 干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞后篩選得到N a n o g 蛋白表達(dá)水平下降7 0 ％．9

4、 0 ％的3 株M C F ．7 單克隆細(xì)胞。3 ．N a n o g 表達(dá)水平下降后M C F ．7 和M D A —M B 一2 3 1 細(xì)胞增殖能力顯著減弱( P < 0 ．0 5 ) 。4 ．N a n o g 基因沉默后M C F 一7 和M D A —M B ．2 3 1 細(xì)胞的增殖指數(shù)下降，細(xì)胞周期G 0 ／G 1 期比例升高，G 2 ／M + S 期比例顯著下降( P < 0 ．0 5 ) 。5 ．N a n

5、 o g 表達(dá)水平下降導(dǎo)致M C F 一7 細(xì)胞克隆形成能力顯著降低( P < 0 ．0 5 ) 。6 ．N a n o g 表達(dá)水平下降導(dǎo)致M C F 一7 細(xì)胞增殖和腫瘤形成能力明顯降低( P < 0 ．0 5 ) 。7 ．體外遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明N a n o g 降表達(dá)后M C F ．7 細(xì)胞的體外遷移能力顯著下降( P < O ．0 5 ) 。8 ．R e a l —t i m e P C R 與W e s t

6、e r nb l o t 技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)N a n o g 基因沉默后C —m y c 和C y c l i n D l 的表達(dá)水平顯著下降，而S T A T 3 和C y c l i n E 表達(dá)水平無明顯變化。9 ．W e s t e r nb l o t 結(jié)果表明在M C F 一7 細(xì)胞中回復(fù)N a n o g 表達(dá)后，C y c l i n D l 表達(dá)水平也回復(fù)到正常水平。1 0 ．染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)發(fā)現(xiàn)在M C F 一7 細(xì)胞