實時熒光定量PCR檢測良性前列腺增生和前列腺癌組織中HER-2表達(dá)以及與Gleason評分的相關(guān)性分析.pdf

1、研究目的：
　　 在我國老年男性人口中,前列腺癌和前列腺增生是常見疾病。當(dāng)前臨床診斷中使用前列腺特異抗原(PSA)作為前列腺癌和前列腺增生的主要鑒別診斷手段,用Gleason評分來進(jìn)行前列腺癌病理分級。然而由于PSA并非前列腺癌細(xì)胞所特有。前列腺增生、前列腺炎,甚至乳腺癌等多種疾病亦會引起血漿中PSA升高。當(dāng)PSA在4～10 ng/ml時,難以區(qū)分PCa和BPH。而進(jìn)行Gleason評分時,受到病理醫(yī)生的主觀看法和經(jīng)驗的影響,也

2、不可能對前列腺癌的惡性程度進(jìn)行客觀,準(zhǔn)確的判定。因此臨床有必要尋找比PSA更可靠的診斷指標(biāo),比Gleason評分更客觀的病理分級指標(biāo)。
　　 近幾年的研究中,對腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)HER-2/neu的異常表達(dá)是腫瘤形成的又一關(guān)鍵因素。HER-2/neu正常時許多分泌性上皮都有低水平的表達(dá)。HER-2/neu通過多種細(xì)胞內(nèi)分子參與信號傳導(dǎo),初步認(rèn)為HER-2/neu的過表達(dá)可以通過交叉激活(transactivation)AR而引起腫瘤

3、。在人類癌癥中,HER-2/neu的分子改變通常是正常基因產(chǎn)物的過度表達(dá)。由于HER-2/neu蛋白定位于漿膜,其擴(kuò)散限制于雙向,即使中等水平HER-2過度表達(dá)也能產(chǎn)生受體結(jié)上活化。免疫組化染色發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞的HER-2蛋白水平比鄰近正常乳腺上皮高10～100倍。Craf等對患有雄激素依賴型前列腺癌的SCID雄小鼠進(jìn)行閹割,就將原來雄激素依賴型LAPC-4模型衍生得到雄激素非依賴型前列腺癌,HER-2/neu蛋白表達(dá)水平隨之升高2-25

4、倍,而且有隨著傳代而HER-2/neu表達(dá)水平上升的趨勢。在一些研究中發(fā)現(xiàn)HER-2/neu過表達(dá)在體外和在活體都有促進(jìn)雄激素非依賴性生長的作用。以上事實證明HER-2/neu擴(kuò)增及過度表達(dá)是引起前列腺癌癥的重要因素。
　　 HER-2/neu蛋白的過度表達(dá)在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,并可作為判斷預(yù)后的一個指標(biāo)。因此,本實驗選用HER-2/neu作為靶基因具有充分的實驗依據(jù)。HER-2/neu在細(xì)胞中的生理功能非常重要,

5、涉及到細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞凋亡和腫瘤中血管的生成等。HER-2介導(dǎo)的胞內(nèi)信號途徑主要包括促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedprotelkinase,MAPK)途徑及磷酸肌醇-3激酶(phosphoinositide-kinase,PI-3K)/絲-蘇氨酸激酶(AKT)途徑。MAPK是HER-2及其他酪氨酸激酶受體激活的主要信號途徑。HER-2介導(dǎo)的另一信號途徑為在細(xì)胞存活中發(fā)揮重要作用的PI-3K/

6、AKT途徑。HER3受體具有結(jié)合PI-3K的基元(motif),而HER-2則缺乏此結(jié)合基元,但HER-2能誘導(dǎo)HER3磷酸化,使PI-3K結(jié)合于HER3,從而導(dǎo)致PI-3K/AKT激酶活化,并介導(dǎo)BAD和半胱天冬酶(caspase)-等靶分子磷酸化。AKT磷酸化并抑制糖原合成激酶3,使細(xì)胞周期蛋白D(cyclin D1)水平升高,驅(qū)動細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期。AKT直接或間接作用的靶分子還包括Forkhead轉(zhuǎn)錄因子及Raf。最近的研究結(jié)果表

7、明,HER-2/neu過表達(dá)可激活A(yù)KT及核因子-κB(nuclear factor-κ B,NF-κ B),持續(xù)活化的AKT和NF-κ B能導(dǎo)致抗凋亡級聯(lián)反應(yīng),使癌細(xì)胞產(chǎn)生對TNF α的抗性,降低宿主對腫瘤的防御能力。HER-2的激活可以導(dǎo)致幾條相對獨(dú)立的途徑的活化:如PLC-γ/PI3-K、STAT/JAK、Ras/MAPK、應(yīng)激活化蛋白激酶、Src等,從而使即早基因fos和Jun的激活。而cyclinD1及p27可能是連接HER-

8、2介導(dǎo)的有絲分裂與促進(jìn)G1/S轉(zhuǎn)化信號通路中的關(guān)鍵因素。HER-2激活后可通過Ras/MAPK和PI3-K/AKT途徑上調(diào)cyclin D1,使p21穩(wěn)定性降低,促進(jìn)G1/S的轉(zhuǎn)化及拮抗細(xì)胞的凋亡；而Herceptin可以下調(diào)cy-clinD1,并上調(diào)p27,抑制Cdk2活性,導(dǎo)致細(xì)胞周期的阻滯。上述實驗結(jié)果說明HER-2有可能成為腫瘤治療中重要的靶點(diǎn),為腫瘤基因治療指明了又一方向。
　　 本論文利用實時熒光定量PCR對良性前列

9、腺增生和前列腺癌的組織中HER-2基因表達(dá)量進(jìn)行定量檢測。結(jié)合臨床中良性前列腺增生的病理論斷和前列腺癌的Gleason評分,探討HER-2基因在前列腺癌的診斷和病理分級中的意義,進(jìn)一步認(rèn)識HER-2的生物行為學(xué)特征。通過下調(diào)HER-2/neu基因在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá),來證實HER-2/neu在細(xì)胞的增殖、分化及抗凋亡方面的作用,為腫瘤的基因治療提供一新的靶點(diǎn)。
　　 材料和方法
　　 收集廣州醫(yī)學(xué)院附屬廣州市第一人民醫(yī)院泌

10、尿外科 2003年9月到2006年12月收治的75例符合入組標(biāo)準(zhǔn)的良性前列腺增生,前列腺癌和正常人的前列腺組織。運(yùn)用實時熒光定量PCR測定標(biāo)本中HER-2基因的表達(dá)量,并記錄石蠟切片觀測樣本的病理論斷和Gleason評分。比較良性前列腺增生和前列腺癌HER-2表達(dá)值的不同,統(tǒng)計前列腺癌中HER-2與Gleason評分中的相關(guān)性。
　　 統(tǒng)計學(xué)處理
　　 計量資料兩組樣本均數(shù)比較使用t檢驗。計量資料與等級資料相關(guān)性分析使用

11、Spearman等級相關(guān)分析。
　　 結(jié)果
　　 1、前列腺組織中HER-2基因表達(dá)值在BPH與PCa組織中有明顯差異。(P<0.01)
　　 2、前列腺癌組織中HER-2基因表達(dá)值在不同的G1eason評分中有差異,與Gleason評分呈等級正相關(guān)(Rs=0.977,P<0.01),隨Gleason評分值升高而升高。
　　 結(jié)論
　　 1、檢測前列腺組織中HER-2基因表達(dá)值可作為鑒別BPH和P