IL-35在病毒性心肌炎發(fā)病中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、病毒性心肌炎(Viral myocarditis,VMC)是一種病毒感染引起的心血管疾病，多種病毒都可引VMC，其中以腸道病毒Coxsackievirus B3(CVB3)感染最常見，嚴(yán)重危害人類健康。目前研究認(rèn)為，CVB3誘導(dǎo)的心肌炎發(fā)病機(jī)理包括病毒對(duì)心肌的直接損傷和過強(qiáng)免疫應(yīng)答導(dǎo)致的間接損傷，但其具體的發(fā)病機(jī)制并未完全闡明。
　　IL-35是新發(fā)現(xiàn)的由Treg細(xì)胞特異性產(chǎn)生的IL-12細(xì)胞因子家族新成員，結(jié)構(gòu)上是由p35和EB

2、I3亞基組成的異源二聚體，是Treg細(xì)胞發(fā)揮最大抑制效應(yīng)所必須的一種細(xì)胞因子。它可以擴(kuò)增Treg細(xì)胞，誘導(dǎo)iTR35細(xì)胞產(chǎn)生和促進(jìn)Th1細(xì)胞分化，以及抑制效應(yīng)T細(xì)胞產(chǎn)生和Th17細(xì)胞分化，在自身免疫病、病毒感染和真菌感染等疾病中發(fā)揮重要作用。為了探討IL-35在CVB3感染的病毒性心肌炎發(fā)病中的作用及其機(jī)制，我們建立了CVB3誘導(dǎo)的BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型，通過病理切片及其評(píng)分顯示心肌炎炎癥程度在感染后第0、3、5、7天的動(dòng)態(tài)變

3、化情況，同時(shí)運(yùn)用ELISA方法檢測了病毒性心肌炎小鼠心臟中IL-35在CVB3感染后第0、1、3、5、7、9天動(dòng)態(tài)表達(dá)情況，并對(duì)第七天小鼠心肌組織病理評(píng)分、體重改變與心肌組織中IL-35表達(dá)分別做了相關(guān)性分析。在此基礎(chǔ)上，我們通過PEI包裹IL-35真核表達(dá)質(zhì)粒，腹腔注射老鼠的方法過表達(dá)模型小鼠心肌組織中IL-35，并運(yùn)用FACS、ELISA、Real-time PCR等實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測相關(guān)指標(biāo)，研究IL-35在VMC中發(fā)病的作用及其機(jī)制。

4、
　　首先我們通過建立雄性BALB/c小鼠病毒性心肌炎模型，研究病毒性心肌炎中IL-35的表達(dá)與心肌炎發(fā)病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。我們記錄了CVB3感染后小鼠體重變化情況，通過病理切片觀察CVB3感染后第0、3、5、7天心肌炎炎癥嚴(yán)重程度變化，運(yùn)用ELISA的方法檢測感染后第0、1、3、5、7、9天心臟中IL-35表達(dá)水平，并對(duì)感染后第七天兩者做了相關(guān)性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn):雄性BALB/c小鼠在CVB3感染后第3天左右體重明顯下降并持續(xù)減輕

5、，同時(shí)心肌組織出現(xiàn)明顯病變并逐漸加劇，而IL-35的表達(dá)在感染后第1、3天逐漸升高，第5、7、9天逐漸下降。并且第七天心肌組織中IL-35的表達(dá)與小鼠體重下降和心肌評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。隨后，我們研究IL-35在病毒性心肌炎中的作用及其可能的機(jī)制，通過腹腔注射PEI包裹的IL-35質(zhì)粒在心肌組織中過表達(dá)IL-35，隨后觀察小鼠感染CVB3后一系列體征變化，包括生存率、體重變化曲線、心體比、CK、CK-MB以及心肌病理評(píng)分，我們發(fā)現(xiàn)過表達(dá)IL-3

6、5對(duì)CVB3誘導(dǎo)的病毒性心肌炎具有保護(hù)作用，與未處理組和載體FC組相比得到顯著改善,且心肌組織中病毒載量和病毒復(fù)制都有顯著下降。由于CVB3感染引起的對(duì)心肌組織的炎癥反應(yīng)的特異性免疫應(yīng)答，是其發(fā)病的重要機(jī)制之一。研究認(rèn)為Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞在病毒性心肌炎中扮演中重要免疫調(diào)節(jié)作用，在我們的實(shí)驗(yàn)中，感染CVB3后第七天的小鼠體內(nèi)，過表達(dá)IL-35抑制了脾臟Th17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)，而對(duì)Treg細(xì)胞表達(dá)沒有顯著影響；心臟中Th

7、17相關(guān)促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-17A、IL-6表達(dá)與對(duì)照組相比，均有顯著下調(diào)。
　　綜上所述，本研究首次在CVB3誘導(dǎo)的病毒性心肌炎模型中動(dòng)態(tài)檢測心肌組織中IL-35的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在心肌炎癥高峰期IL-35下調(diào)表達(dá)，并且IL-35表達(dá)與病毒性心肌炎發(fā)病呈負(fù)相關(guān)；過表達(dá)IL-35對(duì)病毒性心肌炎具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過抑制Th17細(xì)胞及其心肌組織中相關(guān)促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。本研究闡述了IL-35在病毒性心肌炎發(fā)病過程中的